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【科研必修】細(xì)胞蛋白提取全流程解析：從裂解到純化，附高效操作指南！

一、細(xì)胞蛋白提取實(shí)驗(yàn)步驟1、細(xì)胞處理①去除培養(yǎng)基小心棄去六孔板中殘留的細(xì)胞培養(yǎng)基，確?？装鍍?nèi)無(wú)多余液體，以避免干擾后續(xù)操作。②PBS清洗使用預(yù)冷的PBS溶液對(duì)細(xì)胞進(jìn)行2 - 3次清洗，每次加入適量PBS后輕輕晃動(dòng)孔板，使細(xì)胞充分浸潤(rùn)。隨后，用濾紙輕輕吸干孔板底部的液體，注意避免過(guò)度吸干導(dǎo)致細(xì)胞損傷。PBS殘留過(guò)多會(huì)導(dǎo)致后續(xù)裂解液濃度稀釋，影響裂解效果。③配制裂解液在5毫升EP管中配制細(xì)胞裂解液。按100:1:1的體積比將RIPA強(qiáng)裂解液、蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑混合均勻。在加…

Advanced Science“新賽道”！腸道菌群搭檔“天然產(chǎn)物”想不火都難！浙江大學(xué)團(tuán)隊(duì)這波思路真的很行！

今天分享的這篇文章是2025年1月31日由浙江大學(xué)王新霞團(tuán)隊(duì)發(fā)表在Advanced Science上題為：Quercetin-Driven Akkermansia Muciniphila Alleviates Obesity by Modulating Bile Acid Metabolism via an ILA/m6A/CYP8B1 Signaling的研究論文，研究提出了一個(gè)新的代謝調(diào)控軸：ILA/m6A/CYP8B1/CA，揭示了微生物代謝產(chǎn)物ILA通過(guò)m6A修飾調(diào)控CYP8B1的表達(dá)，進(jìn)而影響膽汁酸代謝，最終抑制脂肪積累。綜合運(yùn)用了16S rDNA測(cè)序、非靶向代謝組學(xué)、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)、基因沉默、m6A修飾分析等多種技術(shù)手段，提出…

IF=27.7！糖酵解攜手乳酸代謝，高分文章手到擒來(lái)！這不老外團(tuán)隊(duì)拿下了Cell Metab，真是背靠大樹(shù)好乘涼！ 圖片

今日，為大家?guī)?lái)27.7分的高分文獻(xiàn)思路，讓我們一起領(lǐng)略大佬團(tuán)隊(duì)的嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)~哈哈哈，皮一下，其實(shí)就是繼續(xù)咋們每日文獻(xiàn)思路學(xué)習(xí)哦~今天這篇文章由普林斯頓大學(xué)團(tuán)隊(duì)在Cell Metabolism發(fā)表，以往的研究主要關(guān)注乳酸和脂肪酸的獨(dú)立代謝途徑，本研究首次系統(tǒng)地揭示了乳酸和脂肪酸在TCA循環(huán)中的競(jìng)爭(zhēng)關(guān)系。通過(guò)代謝組學(xué)、示蹤實(shí)驗(yàn)等，創(chuàng)新性地揭示了乳酸在機(jī)體內(nèi)的代謝調(diào)控，這其中有和脂肪酸之間的競(jìng)爭(zhēng)作用、有自身的反饋?zhàn)饔谩⒁灿型ㄟ^(guò)影響胰島素的信號(hào)調(diào)控，更讓人眼前一亮的是，研究通過(guò)…

流式細(xì)胞術(shù)不會(huì)用？6 大領(lǐng)域一文理清

導(dǎo)語(yǔ)流式細(xì)胞術(shù)（FCM）——作為跨越一整個(gè)世紀(jì)，經(jīng)過(guò)一代又一代科學(xué)家們不懈奮斗和努力下的結(jié)晶，現(xiàn)如今已經(jīng)成為探索生物細(xì)胞奧秘的關(guān)鍵技術(shù)。FCM 是在細(xì)胞流動(dòng)的狀態(tài)下，快速檢測(cè)細(xì)胞或顆粒物的熒光信號(hào)，從而判斷細(xì)胞的屬性及分化程度，實(shí)現(xiàn)細(xì)胞的定量分析和分選的技術(shù)。由于 FCM 具有速度快、敏感性高、準(zhǔn)確性好、采集數(shù)據(jù)量大、分析全面、方法靈活等優(yōu)點(diǎn)，在免疫學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、生物化學(xué)等不同研究領(lǐng)域和臨床診療中起著至關(guān)重要的作用。在這場(chǎng)歷史長(zhǎng)河中，諸多領(lǐng)域的科學(xué)家們共同…

重磅！2025年影響因子計(jì)算方式大變革！

近日，科睿唯安(Clarivate)發(fā)布重大政策調(diào)整：自2025年《期刊引證報(bào)告》(JCR)起，撤稿論文的引用數(shù)據(jù)將徹底從影響因子計(jì)算公式中剔除。這一調(diào)整引發(fā)了學(xué)界關(guān)注。期刊影響因子是衡量期刊學(xué)術(shù)影響力的重要指標(biāo)。多年來(lái)，關(guān)于被撤回論文的引用是否應(yīng)納入該指標(biāo)計(jì)算一直存在爭(zhēng)議。盡管被撤回論文僅占科睿唯安 Web of Science 收錄論文的 0.04%，但近年來(lái)整體撤稿率上升至約 0.2%，且撤稿耗時(shí)縮短，促使科睿唯安做出此次政策改變。新規(guī)采取"分子清零、分母保留"策略！根據(jù)新政策，…

你們繼續(xù)卷鐵死亡、銅死亡……吧！我換賽道了，2025“乳酸化”仍是熱點(diǎn)主流！35天發(fā)7+，生信占比99%！

曾經(jīng)叱咤科研界的細(xì)胞死亡，小編也是不止一次為大家分享相關(guān)的熱點(diǎn)思路，但是現(xiàn)在這類文章在生信領(lǐng)域確實(shí)已經(jīng)相對(duì)“泛濫”，想再依靠鐵死亡、自噬、銅死亡等熱點(diǎn)發(fā)篇高分生信文需要在數(shù)據(jù)和分析思路上有足夠的創(chuàng)新性才行。既然這么卷，咱們?yōu)樯斗且粔K湊熱鬧呢？新熱點(diǎn)不是更香嗎？“乳酸化修飾”就是2024年最火的國(guó)自然熱點(diǎn)之一，一出場(chǎng)就是CNS，2025年它的熱度延續(xù)，目前Nature各大子刊，例如NC、Cell Research、CDD（Cell Death & Differentiation）等已紛紛發(fā)表了新年的第一篇…

不容錯(cuò)過(guò)！含 WB 數(shù)據(jù)的文章投稿必看！

在進(jìn)行Western Blot實(shí)驗(yàn)時(shí)，最令人苦惱的莫過(guò)于當(dāng)兩個(gè)目標(biāo)蛋白的條帶位置過(guò)于接近，導(dǎo)致剪膜后曝光亮度難以統(tǒng)一。盡管精心調(diào)整了曝光時(shí)間、上樣量以及凝膠濃度，但由于分子量相近，剪膜時(shí)難免誤傷，實(shí)驗(yàn)重復(fù)多次，既耗時(shí)又費(fèi)力，卻始終無(wú)法徹底解決這一問(wèn)題如今，情況更是每況愈下！Western Blot圖像已成為數(shù)據(jù)造假的重災(zāi)區(qū)。2024年，多部期刊紛紛出臺(tái)新規(guī)，加強(qiáng)對(duì)圖像真實(shí)性的審核。其中，著名的臨床醫(yī)學(xué)期刊JCI（Journal of Clinical Investigation）及其子刊JCI Insight明確要求，提…

帶您了解病理科的色彩藝術(shù)——特殊染色

顯微鏡下的奇妙世界，揭示了細(xì)胞的基本結(jié)構(gòu)，蘇木精 — 伊紅染色法（簡(jiǎn)稱 HE 染色）可以將細(xì)胞的胞核染成藍(lán)色，胞漿染成紅色，事實(shí)上，鏡下的色彩并不是如此單調(diào)，還有一種染色技術(shù)，能為我們呈現(xiàn)出更加五彩斑斕的微觀世界，接下來(lái)讓我們一起走進(jìn)病理科的特殊染色。什么是特殊染色特殊染色是一種非常重要的病理學(xué)技術(shù)。它是使用某些特殊的染料和特定的方法，顯示常規(guī)染色中無(wú)法觀察的細(xì)胞結(jié)構(gòu)與組織成分，還可以顯示病理過(guò)程中出現(xiàn)的異常物質(zhì)、病變、病原體等。在病理診斷、鑒別診斷中…

干貨分享：常用的蛋白分析技術(shù)——WB實(shí)驗(yàn)操作步驟詳解

WB實(shí)驗(yàn)，是一種常用的蛋白分析技術(shù)。實(shí)驗(yàn)中每一步的把握，將會(huì)直接影響結(jié)果的顯現(xiàn)。本文將給大家展示W(wǎng)B實(shí)驗(yàn)的詳細(xì)操作步驟。跟小編一起來(lái)看看吧~蛋白樣品的提取及蛋白含量的檢測(cè)蛋白樣品的好壞，直接決定了能否做出來(lái)蛋白條帶，所以蛋白樣品的提取需嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。凝膠配置凝膠選擇：請(qǐng)根據(jù)蛋白分子量的大小，選擇合適濃度的分離膠，可參考凝膠配置試劑盒中的說(shuō)明書(shū)，或者參考文獻(xiàn)。配膠的APS需要在4° 的冰箱中保存。注意，配膠的時(shí)候，膠一定一定要混勻。配膠的試劑中，…

四大分子互作技術(shù)（ChIP/熒光素酶/Co-IP/Pull-down）實(shí)驗(yàn)原理全解析

導(dǎo)語(yǔ)在生命科學(xué)領(lǐng)域，分子間的相互作用是調(diào)控生命活動(dòng)的核心機(jī)制。無(wú)論是DNA與蛋白質(zhì)的“密碼對(duì)話”，還是蛋白質(zhì)之間的“協(xié)作網(wǎng)絡(luò)”，都需要通過(guò)精準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)技術(shù)來(lái)揭示。本文用通俗易懂的語(yǔ)言，帶您了解ChIP、熒光素酶報(bào)告基因、Co-IP、Pull-down四大技術(shù)的原理、步驟和應(yīng)用場(chǎng)景，助您輕松掌握分子互作研究的核心工具！一、ChIP（染色質(zhì)免疫共沉淀）：捕捉DNA與蛋白的“約會(huì)證據(jù)”原理ChIP技術(shù)通過(guò)甲醛交聯(lián)“凍結(jié)”DNA與結(jié)合蛋白的相互作用，利用特異性抗體捕獲目標(biāo)蛋白及其結(jié)合的DNA片…

【看這一篇就夠了】腫瘤T細(xì)胞亞型鑒定——常見(jiàn)T細(xì)胞Marker基因全解析

T淋巴細(xì)胞（T-lymphocyte）是來(lái)源于骨髓的多能干細(xì)胞，在抗感染與抗腫瘤中起到重要作用。在人體胚胎期和初生期，骨髓中的一部分多能干細(xì)胞或前體T細(xì)胞遷移到胸腺內(nèi)，在胸腺激素的誘導(dǎo)下分化成熟，成為具有免疫活性的T細(xì)胞。成熟的T細(xì)胞經(jīng)血流分布至外周免疫器官的胸腺依賴區(qū)定居，并可經(jīng)淋巴管、外周血和組織液等進(jìn)行再循環(huán)，發(fā)揮細(xì)胞免疫及免疫調(diào)節(jié)等功能。T細(xì)胞的再循環(huán)有利于廣泛接觸進(jìn)入體內(nèi)的抗原，加強(qiáng)免疫應(yīng)答，較長(zhǎng)期保持免疫記憶[1]。T細(xì)胞的細(xì)胞膜上有許多不同的標(biāo)志物，主要…

動(dòng)物行為學(xué)丨4種動(dòng)物行為學(xué)迷宮的比較

在非臨床有效性研究過(guò)程中，主要采用行為學(xué)試驗(yàn)研究藥物對(duì)動(dòng)物學(xué)習(xí)記憶功能的影響。人和動(dòng)物的內(nèi)部心理過(guò)程是無(wú)法直接觀察到的，只能根據(jù)可觀察到的刺激反應(yīng)來(lái)推測(cè)腦內(nèi)發(fā)生的過(guò)程，對(duì)腦內(nèi)記憶過(guò)程的研究只能從人類或動(dòng)物學(xué)習(xí)或執(zhí)行某項(xiàng)任務(wù)后間隔一定時(shí)間，測(cè)量他們的操作成績(jī)或反應(yīng)時(shí)間來(lái)衡量這些過(guò)程的編碼形式、貯存量、保持時(shí)間和它們所依賴的條件等等。學(xué)習(xí)、記憶實(shí)驗(yàn)方法的基礎(chǔ)是條件反射，各種各樣的方法均由此衍化出來(lái)。目前已經(jīng)建立了大量的學(xué)習(xí)記憶研究的行為學(xué)方法，各有優(yōu)…

qPCR | 熒光定量PCR的曲線，你了解多少？

熒光定量PCR（qPCR）是一種在標(biāo)準(zhǔn)PCR技術(shù)基礎(chǔ)上演變而成的技術(shù)，主要用于定量樣本中的DNA或RNA。它通過(guò)監(jiān)測(cè)每個(gè)PCR循環(huán)中擴(kuò)增產(chǎn)物的量，實(shí)現(xiàn)對(duì)靶點(diǎn)起始量的精確測(cè)定。本文將深入探討熒光定量PCR中的關(guān)鍵曲線，包括擴(kuò)增曲線、熔解曲線和標(biāo)準(zhǔn)曲線。 qPCR擴(kuò)增程序熒光定量PCR的擴(kuò)增程序分為擴(kuò)增反應(yīng)階段和熔解反應(yīng)階段。1.擴(kuò)增反應(yīng)階段擴(kuò)增反應(yīng)階段采用兩步法，即每個(gè)循環(huán)結(jié)束后，即刻檢測(cè)熒光信號(hào)。這種實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)方式使得qPCR能夠動(dòng)態(tài)地捕捉擴(kuò)增過(guò)程中的熒光信號(hào)變化，進(jìn)而生成擴(kuò)增曲線?！?/p>

全面解析：?jiǎn)渭?xì)胞核轉(zhuǎn)錄組測(cè)序的優(yōu)勢(shì)與必要性

在單細(xì)胞測(cè)序領(lǐng)域，研究者常權(quán)衡于采用單細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄組測(cè)序（snRNA-seq）或單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序（scRNA-seq）。目前，從已發(fā)表的文章來(lái)看，scRNA-seq是主流方法，但該方法仍存在一定局限性。對(duì)于scRNA-seq，無(wú)論制備單細(xì)胞懸液還是制備原生質(zhì)體懸液都需采用熱酶解法，然而越來(lái)越多的研究表明，在這種條件下細(xì)胞可能受到刺激，導(dǎo)致脅迫相關(guān)應(yīng)答基因表達(dá)增加，從而“人為改變”細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄模式，引起轉(zhuǎn)錄偏好，最終導(dǎo)致所獲得的數(shù)據(jù)無(wú)法真實(shí)反映細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄狀態(tài)，降低了數(shù)據(jù)的可靠性[1-6]。snR…

如何合理地設(shè)計(jì)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)？看這篇文章就夠了 ！

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)作為臨床前研究的核心內(nèi)容，其中實(shí)驗(yàn)動(dòng)物是藥物臨床前研究的最重要的實(shí)驗(yàn)材料和對(duì)象，科學(xué)合理應(yīng)用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物是關(guān)系到臨床前研究的關(guān)鍵環(huán)節(jié)在開(kāi)展臨床前整體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)時(shí)，如何合理地設(shè)計(jì)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)從而科學(xué)有效地闡釋實(shí)驗(yàn)結(jié)果是至關(guān)重要的。臨床前動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)1.動(dòng)物的選擇在剛開(kāi)始設(shè)計(jì)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)時(shí)，可能很多人都會(huì)有這樣的疑問(wèn)：在進(jìn)行臨床前的研究過(guò)程中我們究竟該如何選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的種屬呢？根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵髞?lái)選擇，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇一般需要滿足以下原則：相似性原則：研究對(duì)象各…

國(guó)自然的前沿?zé)狳c(diǎn)解析|IF=12.2！巨噬細(xì)胞和腸道微生物火花四射！

離2025年國(guó)自然申請(qǐng)的日子越來(lái)越近啦！各位科研小伙伴們是不是還在為如何改標(biāo)書(shū)而感到頭疼呢？別擔(dān)心！這可是一個(gè)大好時(shí)機(jī)！我們可以一起探索那些新晉的研究熱點(diǎn)，看看如何將它們與我們手頭的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)巧妙“對(duì)接”。抓住機(jī)會(huì)，玩轉(zhuǎn)研究，把你的項(xiàng)目打磨得更完美，向國(guó)自然“進(jìn)攻”吧！讓我們共同加油，開(kāi)啟科研新篇章！

細(xì)胞實(shí)驗(yàn) ▏細(xì)胞凋亡之Hoechst染色實(shí)驗(yàn)

細(xì)胞凋亡之Hoechst染色實(shí)驗(yàn) 細(xì)胞凋亡是指為維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，由基因控制的細(xì)胞自主的有序的死亡。細(xì)胞凋亡與細(xì)胞壞死不同，細(xì)胞凋亡不是一件被動(dòng)的過(guò)程，而是主動(dòng)過(guò)程，它涉及一系列基因的激活、表達(dá)以及調(diào)控等的作用，它并不是病理?xiàng)l件下，自體損傷的一種現(xiàn)象，而是為更好地適應(yīng)生存環(huán)境而主動(dòng)爭(zhēng)取的一種死亡過(guò)程。實(shí)驗(yàn)原理Hoechst 33258和Hoechst 33342均為非嵌入性熒光染料，它們?cè)诨罴?xì)胞中DNA聚AT序列富集區(qū)域的小溝處與DNA結(jié)合?；罴?xì)胞或固定細(xì)胞均可從低濃度溶液中攝取該染…

動(dòng)物實(shí)驗(yàn) ▏小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨誘導(dǎo)分化

髓間充質(zhì)干細(xì)胞是干細(xì)胞家族的重要成員，來(lái)源于發(fā)育早期的中胚層和外胚層，屬于多能干細(xì)胞，間充質(zhì)干細(xì)胞最初是在骨髓中被發(fā)現(xiàn)，因其具有多向分化潛能、來(lái)源廣泛，獲取簡(jiǎn)單，易于分離培養(yǎng)，體外增殖力強(qiáng)等特點(diǎn)而日益受到人們的關(guān)注。目前發(fā)現(xiàn)其具有能夠分化形成至7種組織細(xì)胞，如成骨細(xì)胞、成脂細(xì)胞等組織細(xì)胞的潛能?？梢詾楣恰⒓∪獾冉Y(jié)締組織的損傷修復(fù)提供潛在的細(xì)胞來(lái)源，被認(rèn)為是骨組織工程中最佳的種子細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)原理 間充質(zhì)干細(xì)胞（MSC）是干細(xì)胞的一種,具有向多種類型細(xì)胞分化…

細(xì)胞增殖檢測(cè)——EdU檢測(cè)法

細(xì)胞增殖是生物體的重要生命特征，指細(xì)胞在周期調(diào)控因子的作用下，通過(guò)DNA復(fù)制等反應(yīng)，完成細(xì)胞分裂的過(guò)程。增殖檢測(cè)一般是分析分裂中細(xì)胞的數(shù)量變化，進(jìn)而反映細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)及活性，目前廣泛應(yīng)用于腫瘤生物學(xué)，分子生物學(xué)，藥代動(dòng)力學(xué)等領(lǐng)域。細(xì)胞增殖檢測(cè)的方法眾多，應(yīng)用非常廣泛，按檢測(cè)原理主要分為4 類：檢測(cè)DNA合成、檢測(cè)代謝活性、檢測(cè)細(xì)胞增殖相關(guān)抗原和檢測(cè)ATP濃度。其中，細(xì)胞DNA合成檢測(cè)是通過(guò)測(cè)定細(xì)胞的DNA合成量來(lái)評(píng)價(jià)細(xì)胞的增殖能力，直接測(cè)定DNA合成是檢測(cè)細(xì)胞增殖最…

Western Blot—實(shí)驗(yàn)步驟及結(jié)果分析

原理 蛋白質(zhì)印跡法 (WB) 是一種廣泛使用的基于抗體的技術(shù)，借助抗體與目的蛋白（抗原）的特異性結(jié)合，檢測(cè)細(xì)胞或組織提取物中的蛋白質(zhì)表達(dá)水平。 實(shí)驗(yàn)流程圖小編將詳細(xì)介紹蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)的步驟，并提供結(jié)果分析的指導(dǎo)，助大家更好的完成實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)步驟01樣品制備蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)的第一步是樣品制備。通常，您可以從細(xì)胞培養(yǎng)物、動(dòng)物組織或微生物培養(yǎng)物等樣品中收集蛋白質(zhì)。在此過(guò)程中，您需要避免蛋白質(zhì)的降解和失活。以下是一般的樣品制備步驟：a. 收集細(xì)胞或組織：使用適當(dāng)?shù)木彌_…