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科研服務

流式細胞實驗

▼ 服務介紹

【實驗原理】

流式細胞術(shù)是20世紀60年代末發(fā)展起來的一項新技術(shù),它利用流式細胞術(shù)快速定量地分析細胞群的物理和化學特性,并根據(jù)這些物理和化學特性準確地選擇細胞。

【實驗步驟】

1. 制備細胞群,離體樣品時用機械分離方法輕柔勻漿化新切組織,通過密度梯度離心法分離不同類型細胞。

2. 貼壁細胞需先用酶液或鈣螯合劑與吸附的細胞培養(yǎng)容器解離。

3. 懸浮細胞可直接進行計數(shù)和活力檢測。

4. 用熒光染料標記抗原,注意抗原密度與熒光染料亮度相匹配。

5. 用流式細胞儀進行檢測和分析。

【常見問題與注意事項】

一、常見問題

(一)細胞聚集

1. 原因:樣本制備過程中操作不當、細胞濃度過高、樣本中有雜質(zhì)等。

2. 解決方法:輕柔操作,調(diào)整細胞濃度,去除樣本中的雜質(zhì)??梢酝ㄟ^過濾或離心的方法去除細胞聚集物。

(二)熒光強度弱

1. 原因:熒光染料濃度過低、細胞活性差、儀器檢測參數(shù)設置不當?shù)取?/p>

2. 解決方法:增加熒光染料的濃度,提高細胞活性,調(diào)整儀器檢測參數(shù),如增加激光功率、調(diào)整增益等。

(三)光譜重疊

1. 原因:同時使用多種熒光染料,且染料之間的光譜重疊嚴重。

2. 解決方法:選擇合適的熒光染料組合,調(diào)整染料的濃度和濾光片,減少光譜重疊??梢酝ㄟ^進行熒光補償來校正光譜重疊的影響。

(四)數(shù)據(jù)變異大

1. 原因:樣本制備的重復性差、儀器性能不穩(wěn)定、數(shù)據(jù)分析方法不當?shù)取?/p>

2. 解決方法:提高樣本制備的重復性,定期對儀器進行校準和維護,選擇合適的數(shù)據(jù)分析方法,如采用統(tǒng)計學方法對數(shù)據(jù)進行分析。

二、注意事項

(一)樣本制備

1. 細胞樣本應盡量保持新鮮,避免長時間存放導致細胞活性下降。如果需要保存,可采用適當?shù)姆椒ㄈ绲蜏乇4?,但要注意避免反復凍融對細胞造成損傷。

2. 樣本制備過程中要輕柔操作,避免劇烈吹打或振蕩,以防止細胞破碎。

3. 確保樣本中的細胞濃度適中,過高的細胞濃度可能導致細胞聚集,影響檢測結(jié)果;過低的細胞濃度則可能導致檢測信號弱。一般來說,細胞濃度在 1×10? 至 1×10? 個細胞 / 毫升較為合適。

(二)熒光染料選擇

1. 根據(jù)實驗目的選擇合適的熒光染料,不同的熒光染料具有不同的激發(fā)和發(fā)射波長,要確保所選擇的熒光染料與流式細胞儀的激發(fā)光源和檢測通道相匹配。

2. 注意熒光染料的穩(wěn)定性和光漂白性,盡量選擇穩(wěn)定性好、光漂白性低的染料。

3. 避免熒光染料之間的光譜重疊,以免影響檢測結(jié)果的準確性。如果需要同時使用多種熒光染料,可以通過調(diào)整染料的濃度和選擇合適的濾光片來減少光譜重疊。

(三)儀器操作

 

1. 在使用流式細胞儀前,要熟悉儀器的操作方法和注意事項,嚴格按照操作規(guī)程進行操作。

2. 定期對儀器進行校準和維護,確保儀器的性能穩(wěn)定。校準包括光路校準、熒光補償校準等。

3. 注意儀器的清潔和消毒,避免樣本之間的交叉污染。使用完儀器后,要及時清理樣本管路和檢測區(qū)域,并用適當?shù)南緞┻M行消毒。

(四)數(shù)據(jù)分析

1. 在進行數(shù)據(jù)分析時,要選擇合適的分析軟件,并熟悉軟件的功能和操作方法。

2. 注意數(shù)據(jù)的質(zhì)量控制,去除異常值和背景噪聲。可以通過設置門限、調(diào)整參數(shù)等方法來提高數(shù)據(jù)的質(zhì)量。

3. 對實驗結(jié)果進行合理的解釋和分析,結(jié)合實驗目的和生物學背景,避免單純依賴數(shù)據(jù)而忽略生物學意義。

 

【交付標準】

1.  實驗報告 

2. 真實實驗結(jié)果

3. 原始圖片

4. 實驗原始數(shù)據(jù)

5. 剩余物料在周期內(nèi)可返還(超過周期,不予返還)

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