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干貨分享！一文教你如何區(qū)分轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導(dǎo)、轉(zhuǎn)染、感染

親愛的科研同仁們，今日我們來深入探討生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域里四個(gè)易混淆的概念：轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導(dǎo)、轉(zhuǎn)染及感染。盡管它們聽似相近，實(shí)則內(nèi)涵及應(yīng)用背景大相徑庭。接下來，我將逐一剖析它們的差異。轉(zhuǎn)化（Transformation）定義：于分子克隆領(lǐng)域，轉(zhuǎn)化專指將質(zhì)粒DNA或以其為載體的重組子直接引入細(xì)菌細(xì)胞的過程。分類：①染色體DNA轉(zhuǎn)化：歷經(jīng)吸附、吸收、整合三階段。DNA一旦被細(xì)胞攝取，即免受外源核酸酶分解。它初為雙鏈，入胞后轉(zhuǎn)單鏈，整合至細(xì)菌染色體。②質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化：先以特定濃度鈣離子預(yù)處理…

qPCR擴(kuò)增曲線與Ct值解讀

在熒光定量 PCR（qPCR）技術(shù)中，qPCR 擴(kuò)增曲線與 Ct 值（或Cq值）是理解和分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果的核心要素。它們就像一把鑰匙，為我們解鎖基因表達(dá)量的秘密，在生命科學(xué)研究和臨床診斷等領(lǐng)域發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。 qPCR通過熒光染料或探針與擴(kuò)增的雙鏈DNA結(jié)合，產(chǎn)生熒光信號(hào)。機(jī)器實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)熒光信號(hào)變化，反映DNA擴(kuò)增的數(shù)量。通過分析熒光信號(hào)的強(qiáng)度，可以定量分析樣品中的目標(biāo)基因。PCR指數(shù)擴(kuò)增過程當(dāng)中，產(chǎn)物量與循環(huán)數(shù)之間的關(guān)系是：擴(kuò)增產(chǎn)物量f(x)=起始模板量S×（1+E）^循環(huán)個(gè)數(shù)n。2、…

想要做好動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，應(yīng)提前了解好的相關(guān)問題

良好的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)對(duì)提高研究工作質(zhì)量，所寫的論文被高水平的雜志接受發(fā)表都非常重要。目前在生物醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方面還存在不少低質(zhì)量的研究工作，一方面是所用動(dòng)物的質(zhì)量不高，級(jí)別低給實(shí)驗(yàn)結(jié)果的科學(xué)性帶來不小的影響，另一方面研究人員在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析方面的訓(xùn)練不足，也是導(dǎo)致研究工作質(zhì)量低下的重要原因。一個(gè)好的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，對(duì)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析來說幫助很大，可以使問題變得更容易解決，而一個(gè)不正確的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，可能使我們不能從實(shí)驗(yàn)結(jié)果中提煉出任何有用的信…

細(xì)胞如何“愈合”？一文詳解細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)全過程

今天聊下細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)的操作及分析步驟，細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)（Cell scratch assay），也被稱作傷口愈合實(shí)驗(yàn)（Wound healing assay），是一種模擬體內(nèi)傷口愈合過程的體外實(shí)驗(yàn)技術(shù)。這項(xiàng)技術(shù)通過在細(xì)胞單層上制造一個(gè)“劃痕”或“傷口”，并記錄細(xì)胞如何填補(bǔ)這一空白區(qū)域，來研究細(xì)胞的遷移行為、修復(fù)能力以及細(xì)胞間的相互作用。感興趣的小伙伴可以留言交流，加V回復(fù)更快！實(shí)驗(yàn)步驟：1 先用marker筆在6孔板背后，用直尺比著均勻的劃?rùn)M線，間隔大約0.5-1cm，橫穿過孔，每孔至少穿過5條線；2 消化…

速學(xué)?。?！WB實(shí)驗(yàn)保姆級(jí)教程——實(shí)驗(yàn)流程和常見問題

WB實(shí)驗(yàn)保姆級(jí)教程WB（Western Blot，蛋白質(zhì)印跡法）實(shí)驗(yàn)的原理是基于抗原-抗體特異性結(jié)合的特性來檢測(cè)特定蛋白質(zhì)。WB作為分子生物學(xué)中最常用的實(shí)驗(yàn)，包含了很多技巧與知識(shí)，想做出漂亮的WB檢測(cè)結(jié)果不是一件易事。WB標(biāo)準(zhǔn)流程：樣本制備→凝膠上樣、電泳→轉(zhuǎn)膜→封閉→抗體孵育→顯影WB實(shí)驗(yàn)流程和結(jié)果解析#01實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)開始前一定要做的事情，是對(duì)所研究的目的蛋白在待測(cè)樣本中的表達(dá)水平、蛋白大小、翻譯后修飾等背景信息進(jìn)行深入的了解，同時(shí)也需要設(shè)置嚴(yán)格的陰性、陽性對(duì)照樣本…

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ蜆?gòu)建——切口疼痛模型

大小鼠切口疼痛模型是研究術(shù)后急性及慢性疼痛機(jī)制、評(píng)估鎮(zhèn)痛藥物效果的重要工具。以下是基于現(xiàn)有研究的詳細(xì)總結(jié)：01常見切口疼痛模型類型1.足底切口模型· 模型特點(diǎn)：通過在大鼠或小鼠后肢足底制造標(biāo)準(zhǔn)化切口（通常長(zhǎng)度1cm），模擬手術(shù)切口疼痛，引發(fā)機(jī)械痛超敏和自發(fā)痛行為?！?應(yīng)用：主要用于研究急性術(shù)后疼痛及慢性術(shù)后疼痛（CPSP）的轉(zhuǎn)化機(jī)制，如神經(jīng)損傷和炎癥反應(yīng)。2.皮膚/肌肉切口牽拉模型（SMIR）· 模型特點(diǎn)：切開皮膚及肌肉后牽拉深層組織（如跖肌），模擬手術(shù)牽拉損傷，導(dǎo)致…

細(xì)胞成管實(shí)驗(yàn)總失敗？這5個(gè)常見問題幫你輕松攻克！

胞成管實(shí)驗(yàn)（如Matrigel基質(zhì)成管實(shí)驗(yàn)）在操作過程中常會(huì)遇到各種問題，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可重復(fù)性和準(zhǔn)確性。以下是常見問題及其解決方法，供參考優(yōu)化實(shí)驗(yàn)：一、細(xì)胞不成管或成管效果差可能原因：細(xì)胞狀態(tài)不佳細(xì)胞傳代次數(shù)過多（如HUVEC超過P8）、活力低或存在污染（如支原體）基質(zhì)問題Matrigel未充分融化（需4℃過夜）、鋪板不均勻或批次差異大培養(yǎng)條件不當(dāng)血清濃度過高（抑制成管）、缺乏促血管生成因子（如VEGF、bFGF）接種密度不合適細(xì)胞過少無法形成網(wǎng)絡(luò)，過多導(dǎo)致堆積解決方法：1.使…

國(guó)自然熱點(diǎn)全家桶來咯！復(fù)旦大學(xué)團(tuán)隊(duì)：巨噬細(xì)胞+單細(xì)胞+脂代謝+免疫治療，高分文章疊疊高！

又到一年國(guó)自然申請(qǐng)季，實(shí)驗(yàn)室的燈光常亮，科研人的發(fā)際線愈發(fā)靠后。傳聞中，能否中標(biāo)不僅靠學(xué)術(shù)實(shí)力，還要點(diǎn)“玄學(xué)加持”。但真正懂行的人都知道，國(guó)自然的關(guān)鍵是：抓熱點(diǎn)、講故事、拼創(chuàng)新。今年小編總結(jié)的熱點(diǎn)中，有幾個(gè)關(guān)鍵詞特別“吸金”：巨噬細(xì)胞、單細(xì)胞技術(shù)、脂代謝與免疫治療。它們像科研圈的“流量明星”，不僅各自精彩，還能“組團(tuán)出道”。試想一下，把單細(xì)胞技術(shù)用在巨噬細(xì)胞上，探索它在脂代謝免疫調(diào)控中的“角色轉(zhuǎn)變”，瞬間一篇國(guó)自然高分標(biāo)書呼之欲出。這不禁讓人感嘆…

【康旭禾實(shí)驗(yàn)外包】提供實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、結(jié)果解讀、論文潤(rùn)色等一站式服務(wù)，讓您以最低的成本獲得最優(yōu)質(zhì)的服務(wù)

【細(xì)胞實(shí)驗(yàn)干貨】各類體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)合集詳解！

體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)是我們開展課題研究及進(jìn)行生物醫(yī)藥醫(yī)學(xué)研究非常重要的途徑，往期我們分享了很多關(guān)于細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的干貨：

手殘黨福音，小鼠心臟灌流實(shí)驗(yàn)全流程詳解！

No.1實(shí)驗(yàn)原理小鼠心臟灌流實(shí)驗(yàn)，依托血液循環(huán)系統(tǒng)，向體循環(huán)注入固定液或生理鹽水，以此清除血液并固定組織。該方法可有效消除血液對(duì)后續(xù)組織切片、免疫染色、基因測(cè)序等實(shí)驗(yàn)的干擾，同時(shí)維持組織的形態(tài)與結(jié)構(gòu)完整性。No.2實(shí)驗(yàn)材料耗材：1mL 注射器、輸液器針頭、止血鉗、鑷子、剪刀、導(dǎo)管，以及眼科鑷、精細(xì)剪等解剖工具。試劑：生理鹽水、4% 多聚甲醛固定液、1.25% 三溴乙醇麻醉劑。設(shè)備：蠕動(dòng)泵、解剖臺(tái)。No.3實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)流程依次為：麻醉小鼠→固定小鼠→打開胸腔→生理鹽水灌流→…

2025年3月國(guó)家自然科學(xué)基金醫(yī)學(xué)領(lǐng)域動(dòng)態(tài)！

根據(jù)2025年3月國(guó)家自然科學(xué)基金相關(guān)官方動(dòng)態(tài)，以下總結(jié)當(dāng)前對(duì)申報(bào)國(guó)自然具有重要參考價(jià)值的核心信息及政策調(diào)整：一、國(guó)家自然科學(xué)基金委員會(huì)全委會(huì)召開，明確2025年資助方向與改革重點(diǎn)1. 基礎(chǔ)研究高質(zhì)量發(fā)展戰(zhàn)略在3月19日召開的第九屆委員會(huì)第三次全體會(huì)議上，科技部部長(zhǎng)陰和俊強(qiáng)調(diào)，2025年將強(qiáng)化基礎(chǔ)研究的體系化布局，推動(dòng)目標(biāo)導(dǎo)向與自由探索“兩條腿走路”，并試點(diǎn)非共識(shí)項(xiàng)目資助機(jī)制，支持高風(fēng)險(xiǎn)、原創(chuàng)性研究。2. 政策亮點(diǎn)：青年項(xiàng)目（A類）結(jié)題分級(jí)評(píng)價(jià)及延續(xù)資助機(jī)制，推動(dòng)人才項(xiàng)…

2025國(guó)自然沖刺必備！大佬整理的Deepseek指令大全！終于求來了

一、國(guó)自然申請(qǐng)書撰寫01選題方向“我的研究圍繞[研究背景]展開，針對(duì)[現(xiàn)存問題]，希望能得到3個(gè)契合國(guó)家自然科學(xué)基金資助導(dǎo)向的研究方向推薦。要求如下：1.每個(gè)方向都要闡述與《國(guó)家自然科學(xué)基金“十四五”發(fā)展規(guī)劃》的關(guān)聯(lián)；2.標(biāo)注近三年該方向立項(xiàng)數(shù)的增長(zhǎng)率；3.給出學(xué)科交叉可能性的分析。02標(biāo)題優(yōu)化“依據(jù)您所推薦的[具體方向]，請(qǐng)生成5個(gè)申報(bào)標(biāo)題。要求：需包含「突破」「機(jī)制」「交叉」等關(guān)鍵詞；區(qū)分理論創(chuàng)新型（體現(xiàn)新模型或新規(guī)律）與技術(shù)應(yīng)用型（突出新方法或新體系）；標(biāo)題…

文獻(xiàn)解讀：AGEs/ROS/NLRP3炎癥小體軸在糖尿病角膜傷口愈合延遲和神經(jīng)再生受損中的作用

No.1標(biāo)題解讀標(biāo)題明確指出了研究的核心內(nèi)容：AGEs/ROS/NLRP3炎癥小體軸在糖尿病角膜傷口愈合延遲和神經(jīng)再生受損中的作用。標(biāo)題中的關(guān)鍵詞包括：AGEs（高級(jí)糖基化終末產(chǎn)物）：糖尿病中常見的代謝產(chǎn)物，與糖尿病并發(fā)癥密切相關(guān)。ROS（活性氧）：氧化應(yīng)激的主要介質(zhì)，參與多種病理過程。NLRP3炎癥小體：一種重要的炎癥信號(hào)復(fù)合物，參與多種炎癥反應(yīng)。糖尿病角膜傷口愈合和神經(jīng)再生：研究的最終目標(biāo)是揭示糖尿病角膜病變的分子機(jī)制。標(biāo)題簡(jiǎn)潔明了，直接點(diǎn)出了研究的核心機(jī)制和病理過程。No…

流式實(shí)驗(yàn)總做不好？這份「高頻常見問題+解決思路」收好！

最近經(jīng)常聽到小伙伴們苦惱于流式結(jié)果不理想，這篇文章為大家總結(jié)了一系列流式實(shí)驗(yàn)常見問題，看完絕對(duì)可以有效避坑（建議存入收藏夾備用）！1. 無信號(hào)/熒光強(qiáng)度弱 ● 補(bǔ)償問題多色流式配色很關(guān)鍵，低表達(dá)的抗原可以用相同熒光素的高表達(dá)抗原代替，或者使用補(bǔ)償微球?！?用于檢測(cè)的抗體不足一定要做抗體滴定，按照說明書的要求加抗體?！?無法接近細(xì)胞內(nèi)靶標(biāo)確定好抗原的表達(dá)位置，選擇合適的染色方法和刺激方法?！?激光器未對(duì)齊做實(shí)驗(yàn)前一定要確保儀器沒有問題。流式細(xì)胞儀是流式的三大…

如何選擇鼠的給藥途徑？給藥方法、劑量對(duì)比及注意事項(xiàng)

在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中，不同的給藥途徑會(huì)影響藥物的吸收、生物利用度和特定實(shí)驗(yàn)的適宜性,研究人員必須熟悉各種途徑，才能以最佳的方式對(duì)動(dòng)物進(jìn)行給藥，得到科學(xué)的，合理的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，下面我們就來聊一聊常用鼠的給藥途徑。No.1皮下注射皮下注射給藥:是將藥液注入皮下結(jié)締組織，經(jīng)毛細(xì)血管、淋巴管吸收進(jìn)入血液循環(huán)的方法。在生物醫(yī)學(xué)研究中，皮下注射也是一種常見的給藥方式。該技術(shù)通常用于皮膚較薄、皮下組織疏松且血管較少的部位，如頸背部、腋下或大腿內(nèi)側(cè)的皮膚。(建議常用部位是鼠兩耳…

【細(xì)胞實(shí)驗(yàn)干貨分享】細(xì)胞凍存與復(fù)蘇常見問題及解決方法

細(xì)胞凍存和復(fù)蘇是在細(xì)胞研究和生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中常見的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，用于長(zhǎng)期保存和重復(fù)使用細(xì)胞。細(xì)胞凍存與復(fù)蘇常見問題1. 細(xì)胞存活率低：有時(shí)，在冷凍和復(fù)蘇過程中，細(xì)胞的存活率可能會(huì)較低① 確保使用新鮮和健康的細(xì)胞進(jìn)行凍存。② 控制好細(xì)胞密度，在適當(dāng)范圍內(nèi)進(jìn)行冷凍。③ 使用合適的凍存液和冷卻速率。④ 在復(fù)蘇過程中盡快進(jìn)行快速?gòu)?fù)蘇，并采用溫和的解凍方法。2. 細(xì)胞凍存為什么要添加保護(hù)劑?細(xì)胞凍存是將細(xì)胞放在低溫環(huán)境，減少細(xì)胞代謝，以便長(zhǎng)期儲(chǔ)存的一種技術(shù)，細(xì)胞在不加任何?！?/p>

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)【心血管疾病模型】心臟驟停動(dòng)物模型構(gòu)建

心臟驟停(cardiacarrest，CA)是指心臟射血功能的突然停止，導(dǎo)致腦血流突然中斷，并伴有自主呼吸消失及喪失意識(shí)的臨床急癥。心臟驟停（CA）是指心臟射血功能的突然終止，導(dǎo)致心臟驟停的病理生理機(jī)制最常見的是心室顫動(dòng)。而對(duì)于心臟驟停后心肺復(fù)蘇（CPR）每延遲1min生存率將下降7％～10％。心臟驟停和心肺復(fù)蘇是復(fù)雜的病理生理變化過程，許多發(fā)病機(jī)制尚不清楚。心臟驟停動(dòng)物模型被用來研究心肺腦復(fù)蘇過程中機(jī)體的病理生理變化，探索新的治療方法和完善現(xiàn)有心肺復(fù)蘇標(biāo)準(zhǔn)干涉方法，比如藥物…

醫(yī)學(xué)基金審核視角：基金申請(qǐng)常見問題分析與修改策略！

醫(yī)學(xué)基金優(yōu)化的三大鐵律：1.臨床問題科學(xué)化：從“治什么病”轉(zhuǎn)向“為什么治不好”；2. 機(jī)制解析維度化：時(shí)空（單細(xì)胞/空間組學(xué)）+ 界面（微環(huán)境互作）+ 動(dòng)態(tài)（實(shí)時(shí)成像）；3. 轉(zhuǎn)化路徑閉環(huán)化：基礎(chǔ)發(fā)現(xiàn)→靶點(diǎn)驗(yàn)證→臨床前模型→精準(zhǔn)干預(yù)方案。4. 修改公式：（精準(zhǔn)臨床場(chǎng)景 × 多維機(jī)制解析） + （原創(chuàng)技術(shù)交叉） = 高競(jìng)爭(zhēng)力醫(yī)學(xué)基金題目俗套，沒有創(chuàng)新問題：標(biāo)題寬泛，缺乏學(xué)科深度與創(chuàng)新聚焦，如“肝癌耐藥機(jī)制研究”。1. 修改建議：收斂靶點(diǎn)：聚焦特定分子/通路，如“基于LncRNA HOT…

單細(xì)胞自測(cè)數(shù)據(jù)+公共數(shù)據(jù)+多組學(xué)篩選關(guān)鍵基因，這個(gè)9分思路簡(jiǎn)直炸裂！

做基礎(chǔ)研究的小伙伴有沒有覺得實(shí)驗(yàn)思路好設(shè)計(jì)，但是如何篩選關(guān)鍵基因是個(gè)難題。今天看一篇，文章在篩選基因方面也做了大量分析，小伙伴們學(xué)會(huì)了，接著再做一篇基礎(chǔ)研究，又是一篇sci到手。1. 文獻(xiàn)簡(jiǎn)介Caveolin-1 identified as a key mediator of acute lung injuryusing bioinformatics and functional research發(fā)表年份：2022影響因子：9期刊名稱：Cell Death & Disease2. 研究背景急性肺損傷(Acute Lung Injury, ALI)是一種嚴(yán)重的呼吸系統(tǒng)疾病，通常繼發(fā)于全身炎癥反應(yīng)。發(fā)病突…