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【實(shí)驗(yàn)技術(shù)】外泌體示蹤方法，你值得擁有！

外泌體專題系列又來啦，先前我們一起研究分享了外泌體的分離提取與鑒定，那接下來我們要知道，外泌體作為傳遞重要信息的載體，它最終又哪去了呢？這不，科學(xué)家們紛紛想出奇招，給外泌體添加了各種“GPS定位系統(tǒng)”標(biāo)記它的行蹤，今天我們就一起了解下外泌體的示蹤方法，了解這些方法是如何帶我們探究外泌體的生物分布、生理功能、遷移和靶向機(jī)制的~先來向大家介紹一下目前比較常見的外泌體示蹤方法~一、親脂性熒光染料示蹤外泌體目前常用的親脂性熒光染料包括DiO、Dil、DiR、DiD、PKH26…

【國自然熱點(diǎn)推薦】腫瘤免疫治療+腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞研究思路 | 王炸組合研究思路保你茅塞頓開

隨著人類對癌癥的了解越發(fā)深入，對癌癥的研究也不再局限于癌細(xì)胞本身，而是將目光投放于癌細(xì)胞置身的環(huán)境——腫瘤微環(huán)境（Tumor microenvironment，TME）中。TME中浸潤著諸多免疫細(xì)胞，這些人體中的“戰(zhàn)士”們毫無疑問處于抗擊腫瘤的最前線，而輔助這些“戰(zhàn)士”的治療手段——腫瘤免疫治療，則在近年逐漸成為國自然的一大熱點(diǎn)。腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞（Tumor-associated macrophages，TAMs）作為TME中分布最廣泛的一類細(xì)胞，順理成章地成為了腫瘤免疫治療中的關(guān)鍵角色，相關(guān)國自然中標(biāo)項(xiàng)目更…

T細(xì)胞耗竭與膽固醇代謝的關(guān)系：或可應(yīng)用于腫瘤免疫治療

今天給大家?guī)淼倪@篇文章2023年5月發(fā)表在Cancer Cell上，論文標(biāo)題為“Exhaustion-associated cholesterol deficiency dampens the cytotoxic arm of antitumor immunity”。中科院分子細(xì)胞科學(xué)卓越創(chuàng)新中心許琛琦團(tuán)隊(duì)與武漢大學(xué)生科院宋保亮院士團(tuán)隊(duì)合作，研究繪制了腫瘤微環(huán)境中膽固醇圖譜，揭示膽固醇缺乏驅(qū)動(dòng)腫瘤微環(huán)境中T細(xì)胞耗竭和功能障礙的機(jī)制。通過CRISPR-Cas9敲除CAR-T細(xì)胞的LXRβ，能夠解除膽固醇缺乏導(dǎo)致的T細(xì)胞耗竭和功能障礙，從而顯著增強(qiáng)CAR-T的肝癌治療效果。臨床問…

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)知多少——裸鼠皮下成瘤實(shí)驗(yàn)技巧

背景裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)，是一種用于研究腫瘤發(fā)生和發(fā)展的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。裸鼠是一種無毛、免疫缺陷的小鼠，在體內(nèi)移植外源性腫瘤細(xì)胞后，由于其免疫系統(tǒng)不完整，不會對異物產(chǎn)生免疫反應(yīng)，因此，腫瘤細(xì)胞可以不受抵抗地存活和生長。通過裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)，可以研究腫瘤細(xì)胞在體內(nèi)的生長、轉(zhuǎn)移、藥物治療等方面的情況，為開發(fā)新的腫瘤治療方法和藥物提供重要的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。但是，裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)涉及動(dòng)物權(quán)益和倫理問題，需要在符合倫理和法律規(guī)定的條件下進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)室常見成瘤細(xì)胞/Common tumorigenic cell…

IF 23.1Gut|乳酸化修飾新突破！復(fù)大虞先濬團(tuán)隊(duì)揭示“乳酸代謝-表觀遺傳-膽固醇免疫抑制軸”新機(jī)制，內(nèi)容實(shí)在精彩！

說到乳酸化這個(gè)賽道，第一想到的就是一系列頂刊，這個(gè)賽道可以說是是臥虎藏龍！就乳酸化修飾的文章，隨隨便便找出一篇都很不錯(cuò)，這不今天就發(fā)現(xiàn)一篇內(nèi)容是非常精彩的文章，跟著康旭禾一起來看看吧~看文章之前咱們來看看這篇文章的作者：虞先濬教授，現(xiàn)任復(fù)大腫瘤醫(yī)院院長，主要研究集中在胰腺方向?？侷F超過1600分，在《Cancer Cell》《Cell Res》《J Clin Oncol》等發(fā)表SCI論文260+，單篇論著最高IF 48.8.可以看出虞教授也是咱們的標(biāo)桿人物了，大佬的思路可得好好學(xué)一下，那就說說該團(tuán)…

干貨收藏 | WB, IHC實(shí)驗(yàn)問題總結(jié)與處理方案詳解

1、western blot 的優(yōu)點(diǎn)答：靈敏，可達(dá)ng級，用Ecl顯色法理論上可達(dá)pg 級。方便，特異性高。2、為什么我的細(xì)胞提取液中沒有目標(biāo)蛋白？答：原因有很多：a) 你的細(xì)胞中不表達(dá)這種蛋白質(zhì)，換一種細(xì)胞；b) 你的細(xì)胞中的蛋白質(zhì)被降解掉了，你必須加入PMSF，抑制蛋白酶活性；c) 你的抗體不能識別目標(biāo)蛋白，多看看說明，看是否有問題。3、我的細(xì)胞提取液有的有沉淀，有的很清亮，為什么呢？答：a) 有沉淀可能因?yàn)槟愕牡鞍讻]有變性完全，可以適當(dāng)提高SDS 濃度，同時(shí)將樣品煮沸時(shí)間延長， …

腫瘤研究基礎(chǔ)---Transwell遷移/侵襲實(shí)驗(yàn)

對腫瘤的研究，主要包括功能研究和機(jī)制研究，細(xì)胞功能的研究主要是體現(xiàn)腫瘤生物學(xué)特性。其中腫瘤細(xì)胞的遷移、侵襲功能研究是必不可少的，腫瘤細(xì)胞的遷移侵襲能力的研究，也為后續(xù)信號通路、功能機(jī)制研究打下基礎(chǔ)。 Transwell 遷移、侵襲實(shí)驗(yàn)主要用于檢測腫瘤細(xì)胞體外的遷移、侵襲能力，由此可見，做好Transwell遷移侵襲實(shí)驗(yàn)是至關(guān)重要的。1.實(shí)驗(yàn)原理 將Transwell小室放入培養(yǎng)板中，小室內(nèi)稱上室，培養(yǎng)板內(nèi)稱下室，上室內(nèi)盛裝上層培養(yǎng)液，下室內(nèi)盛裝下層培養(yǎng)液，上下層培養(yǎng)液以…

經(jīng)典蛋白翻譯后修飾----乙?；揎?/p>

蛋白質(zhì)乙?；揎?，顧名思義指的就是在蛋白質(zhì)原有基礎(chǔ)上面嫁接上乙?；鶊F(tuán)。在細(xì)胞中，乙?；揎椀姆磻?yīng)由乙酰基轉(zhuǎn)移酶所催化，將乙酰輔酶A的乙?；D(zhuǎn)移并添加在蛋白質(zhì)賴氨酸殘基上。在早期的研究中，乙?；揎椧恢北徽J(rèn)為是真核細(xì)胞所特有的一種翻譯后修飾，直到后來研究發(fā)現(xiàn)原核細(xì)胞中也存在著蛋白質(zhì)乙?；揎棥Ｋ?，乙?；揎検窃撕驼婧松锼灿械囊环N翻譯后修飾類型。 蛋白的乙?；揎椩缭?0世紀(jì)60年代就被發(fā)現(xiàn)了，但真正受到科學(xué)界“追捧”卻是經(jīng)歷長達(dá)半個(gè)世紀(jì)的“…

文獻(xiàn)精讀——代謝+銅死亡雙重調(diào)控拿下IF=48.8 Cancer Cell

01文章基本信息周楊、姚兵等團(tuán)隊(duì)在《Cancer Cell》（IF=48.8）發(fā)表的研究揭示，缺氧誘導(dǎo)因子 - 1α（HIF-1α）調(diào)控腫瘤銅死亡，其核心機(jī)制包括 HIF-1α 通過激活 PDK1/3 抑制線粒體 TCA 循環(huán)關(guān)鍵酶 DLAT 表達(dá)、促進(jìn)金屬硫蛋白 MT2A 積累以螯合線粒體銅，以及銅離子直接結(jié)合 HIF-1α 抑制其泛素化降解并穩(wěn)定蛋白原文鏈接：https://doi.org/10.1016/j.ccell.2025.02.01502文章概述研究背景銅死亡機(jī)制與銅穩(wěn)態(tài)失衡及 TCA 循環(huán)中脂?；鞍桩惓＞奂嚓P(guān)。實(shí)體腫瘤常處于缺氧微環(huán)境，而缺氧…

細(xì)胞焦亡研究方法匯總

程序性細(xì)胞死亡(Programmed Cell Death, PCD)，是指細(xì)胞接受某種信號或受到某些因素刺激后，為了維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定而發(fā)生的一種主動(dòng)性消亡過程。凋亡、自噬、細(xì)胞程序性壞死、細(xì)胞焦亡都是是程序性死亡的表現(xiàn)形式。細(xì)胞焦亡是一種最新發(fā)現(xiàn)的炎癥細(xì)胞程序性死亡方式，主要通過炎癥小體介導(dǎo)包含Caspase-1在內(nèi)的多種Caspase的激活，造成包括GSDMD在內(nèi)的多種Gasdermin家族成員發(fā)生剪切和多聚化，造成細(xì)胞穿孔，進(jìn)而引起細(xì)胞死亡。相比于細(xì)胞凋亡（apoptosis），細(xì)胞焦亡發(fā)生的更快，并會伴隨著…

速存！常用的實(shí)驗(yàn)鼠 + 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)技術(shù)

動(dòng)物疾病模型主要用于實(shí)驗(yàn)生理學(xué)、實(shí)驗(yàn)病理學(xué)和實(shí)驗(yàn)治療學(xué)(包括新藥篩選)研究。人類疾病的發(fā)展十分復(fù)雜，臨床積累的經(jīng)驗(yàn)不僅在時(shí)間和空間上都存在局限性，而且在方法和道義上也受到限制。借助于動(dòng)物模型的間接研究，可以有意識地改變那些在自然條件下不可能或不易排除的因素，以便更準(zhǔn)確地觀察模型的實(shí)驗(yàn)結(jié)果并與人類疾病進(jìn)行比較研究，有助于更方便，更有效地認(rèn)識人類疾病的發(fā)生發(fā)展規(guī)律，研究防治措施。1.方案設(shè)計(jì)01常用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)選擇1. 名 稱：KM 小鼠主要用途：廣泛應(yīng)用于藥理學(xué)、毒…

2025年腫瘤研究的熱點(diǎn)方向：乳酸化修飾

在腫瘤的復(fù)雜世界里，代謝異常與免疫逃逸始終是兩大核心難題。最新研究發(fā)現(xiàn)，一種由乳酸驅(qū)動(dòng)的賴氨酸乳?；揎棧↙actylation），正成為連接代謝與免疫的關(guān)鍵 “分子橋梁”。它不僅重塑腫瘤微環(huán)境（TME），還為腫瘤耐藥（靶向治療、免疫治療、化療）提供了溫床。今天，我們將深入解讀這一前沿領(lǐng)域，揭開腫瘤代謝調(diào)控的神秘面紗。一、乳酸化修飾：從代謝廢物到致癌信使長久以來，乳酸被視為腫瘤細(xì)胞糖酵解的“廢物”，但近年來研究發(fā)現(xiàn)，它竟是一種關(guān)鍵的表觀遺傳調(diào)控分子。什么是乳?；?/p>

國自然潛力熱點(diǎn)——“調(diào)節(jié)性B細(xì)胞”來襲！南醫(yī)大團(tuán)隊(duì)也在做，出手就是11分+，快上車！

在咱們所熟悉的免疫細(xì)胞亞群中，調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（CD4+Treg）應(yīng)該是大家關(guān)注的比較多的亞群吧。但是今天薇老師想給大家分享點(diǎn)不一樣的，咱們來聊聊調(diào)節(jié)性B細(xì)胞（Bregs）。首先，什么是Bregs呢？這是一類具有免疫調(diào)節(jié)功能的B淋巴細(xì)胞亞群。傳統(tǒng)B細(xì)胞主要負(fù)責(zé)通過產(chǎn)生抗體的形式清除病原體，而Bregs則主要通過分泌細(xì)胞因子或與其他免疫細(xì)胞互作調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)，以維持免疫系統(tǒng)穩(wěn)態(tài)。而也正是因?yàn)锽regs在免疫調(diào)節(jié)中的關(guān)鍵作用，因此它在腫瘤、自身免疫疾病、感染性疾病、過敏性疾病、代謝性疾病…

動(dòng)物模型構(gòu)建：頂刊23分文章帶你弄懂胰腺炎

大小鼠胰腺炎模型小伙伴們，大家好，今天我們將通過一篇文章來了解大小鼠的胰腺炎模型，本文發(fā)表在2024年1區(qū)Top醫(yī)學(xué)期刊《Gut》上，影響因子為23。標(biāo)題為“Pancreas-directed AAV8-hSPINK1 gene therapy safely and effectively protects against pancreatitis in mice”。文章討論是一種基于腺相關(guān)病毒（AAV8）介導(dǎo)的人類SPINK1基因（hSPINK1），在感染小鼠的胰腺轉(zhuǎn)導(dǎo)效率和安全性，以及三種小鼠模型（雨蛙素誘導(dǎo)、胰管結(jié)扎和Spink1 C .194+2T>C小鼠模型）中預(yù)防和治療胰腺炎的效果…

細(xì)胞死亡沒啥可研究的了？哈爾濱醫(yī)科大學(xué)教你整出新花樣：細(xì)胞焦亡+炎癥小體+乙酰化+類器官，這“逆天”思路審稿人看了都點(diǎn)贊！

親愛的小伙伴們，你們最近科研進(jìn)展的還順利嗎？最近看到一個(gè)新聞非常氣憤，廣東工業(yè)大學(xué)有兩研究生，他們暑假留校參與課題科研工作，但因?yàn)槲缧輹r(shí)間打游戲看視頻娛樂被嚴(yán)厲地處罰。真的是沒有天理了啊，午休時(shí)間都不能讓人休息。還是建議各位小伙伴們要適當(dāng)?shù)膴蕵沸菹?，這樣才能更好地投入科研事業(yè)！接下來給大家推薦一篇思路絕佳的文章，它將細(xì)胞焦亡、炎癥小體、乙?；皖惼鞴俳Y(jié)合在一起，快來看一下吧~1.多種方法進(jìn)行驗(yàn)證：研究使用各種技術(shù)評估了用抗腫瘤藥物治療的CRC細(xì)胞中的細(xì)…

【科研必備】秒懂文獻(xiàn)蛋白互作圖：從 STRING 網(wǎng)絡(luò)到 Co-IP 結(jié)果的全類型解析！

一、酵母雙雜交酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)是一種經(jīng)典的分子生物學(xué)技術(shù)，廣泛用于研究蛋白質(zhì)之間的相互作用。本實(shí)驗(yàn)旨在通過酵母雙雜交系統(tǒng)驗(yàn)證NF-YC9蛋白與BIN2蛋白之間是否存在相互作用。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)包括以下幾部分：1. 實(shí)驗(yàn)材料與培養(yǎng)基培養(yǎng)基：二缺板（SD/-Trp/-Leu）：用于初步篩選融合蛋白的表達(dá)情況，同時(shí)排除單個(gè)融合蛋白的自激活現(xiàn)象。四缺板（SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade）：用于進(jìn)一步驗(yàn)證蛋白質(zhì)之間的相互作用，通過檢測報(bào)告基因（如HIS3和ADE2）的表達(dá)來判斷互作的強(qiáng)度和可靠性。2. 實(shí)驗(yàn)分組…

開啟你的第一個(gè)單細(xì)胞測序研究：保姆級課題設(shè)計(jì)思路全梳理

單細(xì)胞測序技術(shù)能夠提供前所未有的細(xì)胞分辨率，揭示組織內(nèi)不同細(xì)胞類型之間的異質(zhì)性。其分析難點(diǎn)主要在于：如何從繁雜的數(shù)據(jù)中發(fā)現(xiàn)線索，并通過分析和后續(xù)濕實(shí)驗(yàn)來驗(yàn)證該線索。因此不僅需要了解該疾病的病理過程（研究方向，如有藥物還要了解藥理等信息）、疾病相關(guān)組織的病理特點(diǎn)和過程、參與某個(gè)病理過程的細(xì)胞群及其功能表型、調(diào)控細(xì)胞群表型的分子和機(jī)制等信息，還需要了解驗(yàn)證某個(gè)線索需要用到的分析方法、實(shí)驗(yàn)方法以及該方法的優(yōu)勢和局限性。在擁有單細(xì)胞測序數(shù)據(jù)后，如何有效地…

動(dòng)物實(shí)驗(yàn) ▏小鼠T淋巴細(xì)胞 CTLL-2 培養(yǎng)攻略

小鼠T淋巴細(xì)胞 CTLL-2細(xì)胞名稱：CTLL-2中文名稱：小鼠T淋巴細(xì)胞種屬來源：小鼠組織來源：T細(xì)胞細(xì)胞形態(tài)：淋巴母細(xì)胞樣生長特性：懸浮生長培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣，5%二氧化碳溫度：37℃培養(yǎng)基與添加物：基礎(chǔ)培養(yǎng)基：RPMI-1640添加物：10%特級胎牛血清（FBS）、100U/ml（或100IU/ml）IL-2、1%青霉素/鏈霉素（P/S）注意，有些培養(yǎng)體系可能略有不同，但核心成分通常包括RPMI-1640、FBS和IL-2。細(xì)胞培養(yǎng)步驟1. 細(xì)胞復(fù)蘇①從液氮罐或-80℃冰箱中取出凍存管，迅速放入37℃水浴中搖晃解凍。②…

中醫(yī)藥思路翻新！安徽醫(yī)科大學(xué)：網(wǎng)藥+腸道菌群+氨基酸代謝+動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，斬獲Phytomedicine，創(chuàng)新思路不翻車！

最近，有朋友問，想通過中醫(yī)藥發(fā)文，周期長不長？如果單純通過實(shí)驗(yàn)發(fā)文的話確實(shí)會面臨周期長的問題那有什么能縮短發(fā)文周期的方法嗎？小編推薦大家結(jié)合生信技術(shù)！比如網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)、分子對接等。有了這些分析方法的助攻，可以縮短發(fā)文周期！如果想更快，可以采用生信為主、實(shí)驗(yàn)為輔的模式！今天，小編給大家?guī)硪黄嗅t(yī)藥新思路。作者創(chuàng)新性地采用多種聯(lián)合分析（網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)（NP）與代謝組學(xué)聯(lián)合分析、腸道菌群測序技術(shù)與代謝組學(xué)聯(lián)合分析），探索中藥湯劑在慢性萎縮性胃炎伴肝郁脾虛中的…

鐵死亡在心血管疾病中的調(diào)控機(jī)制及相關(guān)動(dòng)物模型構(gòu)建思路!

往期我們講過鐵死亡的主要調(diào)控機(jī)制和通路：