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動(dòng)物實(shí)驗(yàn)作為臨床前研究的核心內(nèi)容，其中實(shí)驗(yàn)動(dòng)物是藥物臨床前研究的最重要的實(shí)驗(yàn)材料和對象，科學(xué)合理應(yīng)用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物是關(guān)系到臨床前研究的關(guān)鍵環(huán)節(jié)

在開展臨床前整體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)時(shí)，如何合理地設(shè)計(jì)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)從而科學(xué)有效地闡釋實(shí)驗(yàn)結(jié)果是至關(guān)重要的。

臨床前動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.動(dòng)物的選擇

在剛開始設(shè)計(jì)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)時(shí)，可能很多人都會有這樣的疑問：在進(jìn)行臨床前的研究過程中我們究竟該如何選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的種屬呢？

根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵髞磉x擇，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇一般需要滿足以下原則：

1. 相似性原則：研究對象各方面（功能、代謝、結(jié)構(gòu)等）與人類相似的動(dòng)物。（使用系統(tǒng)發(fā)育水平最低的動(dòng)物，符合3R原則中的替代原則）

  2.特異性原則：解剖、生理特點(diǎn)符合實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊蟮膶?shí)驗(yàn)動(dòng)物。

  3.標(biāo)準(zhǔn)化原則：遺傳背景清楚，模型性狀顯著且穩(wěn)定。

  4.經(jīng)濟(jì)易獲性原則：易獲得、價(jià)格便宜、易飼養(yǎng)。5.適宜規(guī)格原則：選用與實(shí)驗(yàn)要求相適應(yīng)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物規(guī)格。

（1）年齡：一般選擇成熟后青壯年動(dòng)物。

（2）體重：在正常營養(yǎng)狀態(tài)和飼養(yǎng)條件下，體重與年齡有一定相關(guān)性。

（3）性別：同品種不同性別動(dòng)物對外界刺激反應(yīng)一般不一致。

注：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物應(yīng)由取得實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證的單位提供，并提供動(dòng)物的種屬、品系、來源、年齡、性別、體重、飼養(yǎng)環(huán)境和條件、動(dòng)物飲食、動(dòng)物健康狀況（包括意外死亡）等信息。

2.實(shí)驗(yàn)分組

實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)應(yīng)進(jìn)行合理分組，注意設(shè)置全面的對照組。

在實(shí)驗(yàn)中設(shè)立對照組動(dòng)物，是為了與實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物有一個(gè)直接對應(yīng)的關(guān)系，以消除過多變量和未知變量對實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生的影響。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中的對照實(shí)驗(yàn)一般可分為空白對照、陽性對照和陰性對照。

動(dòng)物分組時(shí)必須將動(dòng)物隨機(jī)分配到實(shí)驗(yàn)各組，以確保研究的變量在各組中不會導(dǎo)致偏差數(shù)據(jù)。

3.動(dòng)物數(shù)量的確定

樣本含量是指動(dòng)物實(shí)驗(yàn)所需要的動(dòng)物數(shù)量。樣本含量過小，抽樣誤差大，推論總體的精密度和準(zhǔn)確度都比較差，不能發(fā)現(xiàn)實(shí)際存在的差別；樣本含量過大，首先不符合動(dòng)物福利，同時(shí)也浪費(fèi)人力、物力、財(cái)力和時(shí)間。

針對不同的研究目的，樣本含量有不同的確定方式，有的實(shí)驗(yàn)是得到足夠的組織標(biāo)本進(jìn)行分析、有的實(shí)驗(yàn)是利用少量動(dòng)物進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)或初步探索性實(shí)驗(yàn)、有的是進(jìn)行一個(gè)假設(shè)的驗(yàn)證的正規(guī)實(shí)驗(yàn)。

需注意以下兩點(diǎn)：

（1）由于考慮實(shí)驗(yàn)中動(dòng)物死亡、剔除等因素，實(shí)驗(yàn)中各組實(shí)際使用的動(dòng)物數(shù)量應(yīng)比理論上計(jì)算的樣本量適當(dāng)增加。

（2）不均衡設(shè)計(jì)的應(yīng)用。在一個(gè)研究中，并不要求各組都有相同數(shù)量的實(shí)驗(yàn)單位。實(shí)際上，我們通?？梢栽O(shè)計(jì)一組的實(shí)驗(yàn)單位多于其他組。最常見的不均衡設(shè)計(jì)是高劑量組動(dòng)物較多，以彌補(bǔ)研究中動(dòng)物死亡造成的數(shù)據(jù)丟失，或低劑量組動(dòng)物數(shù)較多，以提高閾值水平效應(yīng)檢測的靈敏性或確定無效應(yīng)的可信性。

4.實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的獲取

除了一些傳統(tǒng)常規(guī)的取材后檢測（組織學(xué)、組織形態(tài)學(xué)指標(biāo)、病理生理生化指標(biāo)等），隨著小動(dòng)物成像技術(shù)的發(fā)展，活體成像這種非侵襲性成像在研究中發(fā)揮著越來越重要的作用。

5.數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)和分析

幾乎所有的實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，包括有非常明顯的實(shí)驗(yàn)效果的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，都需要用適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)分析方法進(jìn)行評價(jià)。

數(shù)據(jù)的分析應(yīng)主要圍繞研究的目的進(jìn)行，對實(shí)驗(yàn)的假設(shè)進(jìn)行驗(yàn)證。同時(shí)，數(shù)據(jù)分析的主要目標(biāo)是提取數(shù)據(jù)中所有能被解釋的有用信息，考慮生物的變異和實(shí)驗(yàn)所產(chǎn)生的誤差對研究結(jié)果的影響，尤其是防止抽樣誤差對于實(shí)驗(yàn)（治療）效果的錯(cuò)誤判斷的重要工具。

生物統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)的方法很多，最常用的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法有：各組間計(jì)量資料的比較用方差分析法（F檢驗(yàn)，one-way anova單因素方差分析），各組間計(jì)數(shù)資料的比較用卡方檢驗(yàn)，通過概率計(jì)算得出各組間差異是否具有顯著性意義。

一般認(rèn)為兩組數(shù)據(jù)之間差異概率P≤0.05具有顯著性意義，P≤0.01具有極顯著性意義，表明兩組數(shù)據(jù)之間的差異不是抽樣誤差，而是處理因素作用所致。

現(xiàn)在一般實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)處理有專用軟件，如SPSS、SAS、SYSTAT、GraphPad Prism、R語言等。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告內(nèi)容

1.實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

根據(jù)產(chǎn)品的設(shè)計(jì)特征和預(yù)期適用范圍，申請人確定實(shí)驗(yàn)?zāi)康?。對于多孔結(jié)構(gòu)產(chǎn)品，需要證明多孔結(jié)構(gòu)能夠與周圍骨組織形成骨整合。對于可降解產(chǎn)品，需要證明材料的降解速率與新骨形成的速率基本匹配。

2.植入樣品

提供實(shí)驗(yàn)樣品和對照樣品在理化表征、加工過程、滅菌方法等方面的比較信息。

3.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物應(yīng)由持有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證的機(jī)構(gòu)提供，并提供動(dòng)物的種類、品系、來源、年齡、性別、體重、飼養(yǎng)環(huán)境和條件、飲食情況以及動(dòng)物健康狀況（包括意外死亡）等信息。在綜合考慮觀察時(shí)間點(diǎn)、各時(shí)間點(diǎn)的觀察指標(biāo)以及各觀察指標(biāo)所需的樣本量后，計(jì)算所需的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)量。

主營項(xiàng)目

1. 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

動(dòng)物飼養(yǎng)、疾病造模、行為學(xué)檢測、心功能、無創(chuàng)血壓、血常規(guī)、全自動(dòng)生化檢測等

2. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

CCK8/MTT、原代細(xì)胞分離、流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞劃痕、侵襲、遷移、EDU染色、轉(zhuǎn)染、穩(wěn)定株

3. 分子生物學(xué)

PCR檢測、熒光定量PCR、絕對定量PCR、端粒酶長度、pull down、雙熒光素酶、SSR、SNP檢測等

4. 蛋白實(shí)驗(yàn)

WB、Co-IP、酵母雙雜

5. 病理實(shí)驗(yàn)

HE染色、免疫組學(xué)、電鏡

6. 生理生化實(shí)驗(yàn)

肝腎功能、抗氧化、免疫反應(yīng)等生理免疫指標(biāo);動(dòng)植物營養(yǎng)指標(biāo)、微量元素、重金屬、酶活等。

7. 多組學(xué)實(shí)驗(yàn)

基因組、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、蛋白組、代謝組、微生物多樣性、宏基因組、生信分析

8. 整體課題實(shí)驗(yàn)

方案設(shè)計(jì)、整體實(shí)驗(yàn)交付、標(biāo)書寫作、論文潤色、協(xié)助投稿

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