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【實驗原理】

EDU是一種胸腺嘧啶核苷類似物，能夠在細胞增殖時期代替T滲入正在復制的DNA分子，通過基于EDU與Apollo?熒光染料的特異性反應檢測DNA復制活性，通過檢測EDU標記便能準確地反映細胞的增殖情況。EDU檢測方法更快速、更靈敏、更準確。EDU檢測染料在細胞內很容易擴散，無需DNA變性（酸解、熱解、酶解等）即可有效檢測，可有效避免樣品損傷，在細胞和組織水平能更準確地反映細胞增殖等現(xiàn)象。

【實驗方法】

Step1: 細胞預處理：按實驗設置準備處理細胞。

Step2: EDU標記：將EDU工作液與培養(yǎng)基1:1混合，加入待檢樣品中，置于37℃飽和濕度、含5% 二氧化碳的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一段時間。

Step3: 細胞固定：EDU標記完成后，用4%的多聚甲醛室溫固定15-20min。

Step4: 細胞通透：細胞固定完成后，用0.3%的TritonX-100室溫通透10-15min。

Step5: EDU檢測：加Click反應液室溫避光孵育至鏡下看到熒光。

Step6: Hoechst33442染色：室溫避光孵育10min。

Step7: 結果分析：圖像獲取及結果分析。

【常見問題與注意事項】

1、EDU的濃度與孵育時間有關，短時間（小于4h）宜采用高濃度（20-50μM），長時間（大于24h）宜采用低濃度（1-10μM）

2、EDU孵育時間取決于細胞周期，一般為細胞周期的1/10至1/5，但大多數(shù)細胞系均可采用4h-6h孵育時間。

3、EDU反應液應現(xiàn)配現(xiàn)用，孵育時間一般約為室溫30min-2h。

4、貼壁細胞宜采用熒光檢測方式，適用于熒光顯微鏡、共聚焦顯微鏡、高內涵篩選儀檢測。懸浮細胞可用涂片方式熒光檢測，亦可采用流式細胞儀分析，流式細胞儀需要具備相應熒光通道

5、染色完成后立即進行檢測；如果條件限制，請避光4℃濕潤保存待測，但不應超過3天，若為細胞爬片或涂片，可使用抗熒光淬滅封片后4℃保存及進行檢測。

【交付標準】

1. 實驗報告 

2. 真實實驗結果

3. 原始圖片

4. 實驗原始數(shù)據(jù)

5. 剩余物料在周期內可返還（超過周期，不予返還）