細胞凋亡之Hoechst染色實驗
細胞凋亡是指為維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定,由基因控制的細胞自主的有序的死亡。細胞凋亡與細胞壞死不同,細胞凋亡不是一件被動的過程,而是主動過程,它涉及一系列基因的激活、表達以及調(diào)控等的作用,它并不是病理條件下,自體損傷的一種現(xiàn)象,而是為更好地適應生存環(huán)境而主動爭取的一種死亡過程。
實驗原理
Hoechst 33258和Hoechst 33342均為非嵌入性熒光染料,它們在活細胞中DNA聚AT序列富集區(qū)域的小溝處與DNA結合?;罴毎蚬潭毎蓮牡蜐舛热芤褐袛z取該染料,從而使細胞核著色,故又把此類染料稱為DNA探針。Hoechst 33342和Hoechst 33258均可溶于水并在水溶液中保持穩(wěn)定。Hoechst-DNA的激發(fā)和發(fā)射波長分別550 nm和460 nm。在熒光顯微鏡紫外光激發(fā)時,Hoechst-DNA發(fā)出亮藍色熒光。Hoechst染色是熒光染色中的一種類型,專門用來在熒光顯微觀察下標示DNA,由于可將DNA標示,此種染色方式也可以用來辨識內(nèi)含DNA的細胞核及線粒體的位置。
實驗步驟?
(1)取處理后的各組樣本,加入1 mL 4%多聚甲醛室溫固定20 min,棄去固定液,加入1 mL PBS清洗兩次,每次3 min,棄去PBS;
(2)加入1 mL Hoechst 33258染色液,室溫染色5 min;
(3)棄掉染色液用PBS清洗五遍,每次3 min,最后加入1 mL PBS;
(4)熒光顯微鏡下觀察并拍照。
凋亡的細胞核染色增強,熒光更為明亮,呈圓狀或固縮狀、團塊狀結構。非凋亡細胞核呈熒光深淺不一的結構樣特征。二者形態(tài)相異,易區(qū)分辨別。
注意事項
Hoechst染色液需避光保存。
加入工作液后盡量當天完成拍攝避免染料淬滅影響。
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主營項目
1. 動物實驗
動物飼養(yǎng)、疾病造模、行為學檢測、心功能、無創(chuàng)血壓、血常規(guī)、全自動生化檢測等
2. 細胞實驗
CCK8/MTT、原代細胞分離、流式細胞實驗、細胞劃痕、侵襲、遷移、EDU染色、轉(zhuǎn)染、穩(wěn)定株
3. 分子生物學
PCR檢測、熒光定量PCR、絕對定量PCR、端粒酶長度、pull down、雙熒光素酶、SSR、SNP檢測等
4. 蛋白實驗
WB、Co-IP、酵母雙雜
5. 病理實驗
HE染色、免疫組學、電鏡
6. 生理生化實驗
肝腎功能、抗氧化、免疫反應等生理免疫指標;動植物營養(yǎng)指標、微量元素、重金屬、酶活等。
7. 多組學實驗
基因組、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、蛋白組、代謝組、微生物多樣性、宏基因組、生信分析
8. 整體課題實驗
方案設計、整體實驗交付、標書寫作、論文潤色、協(xié)助投稿
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