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髓間充質(zhì)干細(xì)胞是干細(xì)胞家族的重要成員，來源于發(fā)育早期的中胚層和外胚層，屬于多能干細(xì)胞，間充質(zhì)干細(xì)胞最初是在骨髓中被發(fā)現(xiàn)，因其具有多向分化潛能、來源廣泛，獲取簡單，易于分離培養(yǎng)，體外增殖力強(qiáng)等特點(diǎn)而日益受到人們的關(guān)注。目前發(fā)現(xiàn)其具有能夠分化形成至7種組織細(xì)胞，如成骨細(xì)胞、成脂細(xì)胞等組織細(xì)胞的潛能?？梢詾楣?、肌肉等結(jié)締組織的損傷修復(fù)提供潛在的細(xì)胞來源，被認(rèn)為是骨組織工程中最佳的種子細(xì)胞。

實(shí)驗(yàn)原理

 間充質(zhì)干細(xì)胞（MSC）是干細(xì)胞的一種,具有向多種類型細(xì)胞分化的能力,可以分化為神經(jīng)、骨、軟骨、肌腱、脂肪、上皮等多種細(xì)胞。茜素紅染色法是MSC細(xì)胞成骨誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)操作和鑒定間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化的一個(gè)重要方法，其原理是間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化的過程中,在細(xì)胞表面沉積鈣鹽,形成鈣結(jié)節(jié),鈣離子與茜素紅螯合,被染成紅色或者紫紅色。

實(shí)驗(yàn)步驟

01

細(xì)胞接種

取對(duì)數(shù)生長期的細(xì)胞，按照適宜細(xì)胞密度接種至包被后的培養(yǎng)器皿中，于37℃，5% CO2培養(yǎng)環(huán)境下培養(yǎng)至匯合度70-80%，棄掉上清，加入成骨誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基。

02

細(xì)胞分化誘導(dǎo)

每2-3天更換成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基，于37℃，5%CO2培養(yǎng)環(huán)境下培養(yǎng)約14-21天，并注意觀察細(xì)胞形態(tài)變化。根據(jù)細(xì)胞鈣鹽結(jié)晶析出和鈣質(zhì)結(jié)節(jié)形成的情況，決定終止細(xì)胞誘導(dǎo)的時(shí)間，進(jìn)行染色鑒定。

03

細(xì)胞固定

根據(jù)茜素紅試劑說明書進(jìn)行細(xì)胞固定。

04

茜素紅染色

根據(jù)茜素紅試劑說明書加入適量茜素紅染液染20-30min，吸去茜素紅染液，用蒸餾水充分洗滌。

05

結(jié)果處理

顯微鏡下觀察成骨染色效果，并進(jìn)行圖像采集和誘導(dǎo)評(píng)估。誘導(dǎo)成功時(shí)，鈣質(zhì)結(jié)節(jié)會(huì)與茜素紅染料結(jié)合后呈現(xiàn)紅色或橘紅色。

注意事項(xiàng)

1. 實(shí)驗(yàn)操作過程中要避免污染。

2. 接種細(xì)胞前可對(duì)培養(yǎng)器皿進(jìn)行包被處理，以防止成骨誘導(dǎo)后期細(xì)胞出現(xiàn)成片脫落的現(xiàn)象。

3. 誘導(dǎo)后細(xì)胞易脫壁，換液操作要盡可能輕。必要時(shí)可進(jìn)行半量換液。

4. 茜素紅染色時(shí)，若染色效果較淺可以適當(dāng)延長時(shí)間，或選做蘇木素復(fù)染處理。

如有需要，請(qǐng)聯(lián)系我們~

主營項(xiàng)目

1. 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

動(dòng)物飼養(yǎng)、疾病造模、行為學(xué)檢測、心功能、無創(chuàng)血壓、血常規(guī)、全自動(dòng)生化檢測等

2. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

CCK8/MTT、原代細(xì)胞分離、流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞劃痕、侵襲、遷移、EDU染色、轉(zhuǎn)染、穩(wěn)定株

3. 分子生物學(xué)

PCR檢測、熒光定量PCR、絕對(duì)定量PCR、端粒酶長度、pull down、雙熒光素酶、SSR、SNP檢測等

4. 蛋白實(shí)驗(yàn)

WB、Co-IP、酵母雙雜

5. 病理實(shí)驗(yàn)

HE染色、免疫組學(xué)、電鏡

6. 生理生化實(shí)驗(yàn)

肝腎功能、抗氧化、免疫反應(yīng)等生理免疫指標(biāo);動(dòng)植物營養(yǎng)指標(biāo)、微量元素、重金屬、酶活等。

7. 多組學(xué)實(shí)驗(yàn)

基因組、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、蛋白組、代謝組、微生物多樣性、宏基因組、生信分析

8. 整體課題實(shí)驗(yàn)

方案設(shè)計(jì)、整體實(shí)驗(yàn)交付、標(biāo)書寫作、論文潤色、協(xié)助投稿

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康旭禾生物提供包括動(dòng)物實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)、分子實(shí)驗(yàn)、病理實(shí)驗(yàn)、流式檢測實(shí)驗(yàn)及論文翻譯、潤色、投稿輔助等相關(guān)的各項(xiàng)服務(wù)。

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