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【實驗原理】

代謝組學(xué)實驗的原理是通過定性鑒別和定量描述生物基質(zhì)中小分子代謝物的表達與修飾變化，以系統(tǒng)反饋生命體對自身機體調(diào)控或外界環(huán)境擾動所做出的代謝應(yīng)答。代謝組學(xué)研究的樣本主要包括生物體液和復(fù)雜的生物組織或細(xì)胞樣本。常用的分析鑒定技術(shù)有色譜質(zhì)譜聯(lián)用和核磁共振。

【實驗步驟】

1. 實驗設(shè)計

2. 樣品制備

3. 數(shù)據(jù)采集

4. 數(shù)據(jù)預(yù)處理

5. 多實驗數(shù)據(jù)集成/數(shù)據(jù)分析

【常見問題與注意事項】

取樣基本原則

代表性和一致性

實驗組與對照組樣本在取材部位、時間處理等方面盡可能保持一致，從而保證實驗的可信度；

迅速性

操作過程迅速，最大限度縮短樣本采集到實驗的時間；

低溫原則

所有樣本離體后，分離步驟應(yīng)在4℃或冰上進行，分離好的樣本立即存于-80℃，以免樣本產(chǎn)生進一步代謝活動；

血液樣本收集指南

血清：

1）用促凝管（沒有促凝管則用離心管）收集血液，將促凝管/離心管直立、靜置于試管架上，避免振蕩、摔落；

2）避免陽光直射，室溫；

3）檢查凝血完全后，2500 ~ 3000 rpm，4℃ 低速離心5 min，吸取200 μL上清液至1.5 mL離心管中，若上清液較多可每管200 μL、多管分裝，于-80 ℃凍存待用；

4）嚴(yán)禁反復(fù)凍融，如發(fā)生溶血則該樣本不合格、需重新準(zhǔn)備樣本。合格樣本用干冰運輸。

血漿：

1）用抗凝管采血，采血后立刻輕柔上下顛倒8次，使抗凝劑與血液均勻混合（動作輕柔，以避免產(chǎn)生溶血）；

2）2500 ~ 3000 rpm，4 ℃低速離心5 min，吸取200 μL上清液分裝至1.5mL離心管中，-80 ℃凍存待用；

3）血液樣本采集后應(yīng)立即把血漿從全血中分離出來，最晚不遲于采血后1 h內(nèi)分離出血漿。合格樣本用干冰運輸。

（1）試管的使用

涉及到RNA等的多組學(xué)實驗取樣，請勿使用肝素鈉抗凝管（對 RNA 相關(guān)實驗有嚴(yán)重影響，抑制反轉(zhuǎn)錄酶活性而導(dǎo)致cDNA量不足）；

核磁實驗（NMR）請勿使用EDTA抗凝管（影響圖譜采譜）；

代謝實驗取樣不建議使用檸檬酸鈉抗凝管（檸檬酸是TCA循環(huán)中的重要物質(zhì)，使用檸檬酸鈉抗凝劑會引入外源污染），請根據(jù)實驗具體情況選用合適的抗凝管。

（2）影響因素

取血時如用酒精消毒，請擦干擦拭部位，待酒精完全揮發(fā)后再取樣；

取血時如有使用麻醉劑，建議用異氟醚消毒，以避免在譜圖中出現(xiàn)干擾峰。

（3）產(chǎn)率

血清參考產(chǎn)率：30% ~ 50%（例如：1 mL 全血大約能得 0.3 ~ 0.5 mL 血清）。

血漿參考產(chǎn)率：≈ 50 %（例如：1 mL全血大約能得 0.5 mL 血漿）。

采全血時如使用真空采血管，建議使用促凝管。

（4）凍存管的使用

強烈推薦收集盡量多的樣本并分裝凍存（同批次樣本可以用于多項實驗，且避免反復(fù)凍融而導(dǎo)致結(jié)果不理想），分裝保存時推薦使用1.5 mL離心管，因為螺口凍存管帽內(nèi)有一個密封用的橡膠墊圈，長期在-80 ℃/干冰等低溫下，橡膠圈會變硬脆、易脫落，導(dǎo)致管口密封不嚴(yán)，樣本滲露。

【交付標(biāo)準(zhǔn)】

1. 實驗報告 

2. 真實實驗結(jié)果

3. 原始圖片

4. 實驗原始數(shù)據(jù)

5. 剩余物料在周期內(nèi)可返還（超過周期，不予返還）

康旭禾生物提供包括動物實驗、細(xì)胞實驗、分子實驗、病理實驗、流式檢測實驗及論文翻譯、潤色、投稿輔助等相關(guān)的各項服務(wù)。

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