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背景

裸鼠成瘤實驗，是一種用于研究腫瘤發(fā)生和發(fā)展的動物實驗。裸鼠是一種無毛、免疫缺陷的小鼠，在體內(nèi)移植外源性腫瘤細(xì)胞后，由于其免疫系統(tǒng)不完整，不會對異物產(chǎn)生免疫反應(yīng)，因此，腫瘤細(xì)胞可以不受抵抗地存活和生長。

通過裸鼠成瘤實驗，可以研究腫瘤細(xì)胞在體內(nèi)的生長、轉(zhuǎn)移、藥物治療等方面的情況，為開發(fā)新的腫瘤治療方法和藥物提供重要的實驗數(shù)據(jù)。但是，裸鼠成瘤實驗涉及動物權(quán)益和倫理問題，需要在符合倫理和法律規(guī)定的條件下進(jìn)行。

實驗室常見成瘤細(xì)胞/Common tumorigenic cells in laboratory

常規(guī)較容易成瘤的細(xì)胞：Hep-G2（肝癌），Hep2（喉癌），NCI-H460(大細(xì)胞肺癌)， A431(表皮癌)，SK-OV-3（卵巢癌），MCF-7（乳腺癌）SKBR3， A375/B16-F10（人黑色素瘤細(xì)胞），SGC7901 人胃腫瘤細(xì)胞 ，KB人口腔表皮樣癌細(xì)胞

成瘤較慢的細(xì)胞：CNE（鼻咽癌），A549（肺癌）， SPC-A-1（肺腺癌）， HT-29（結(jié)腸癌），BEL-7402（肝癌），MDA-MB-231 乳腺癌 ， CT26 （小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞 ），SH-SY5Y (人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞 ) ， U251 （人膠質(zhì)瘤細(xì)胞） ， BGC-823（人胃癌細(xì)胞） ，PC-3 （人前列腺癌細(xì)胞）

一些比較有爭議的細(xì)胞：Hela（宮頸癌），HCT（人回盲腸癌細(xì)胞/人結(jié)直腸癌腺癌細(xì)胞）。其他：BMSC（骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞）

成瘤實驗技巧要點 /Key points of skill

細(xì)胞的狀態(tài)是成瘤實驗的關(guān)鍵，所以細(xì)胞生長狀態(tài)一定要好，取處于對數(shù)生長期的細(xì)胞，細(xì)胞達(dá)80-90%左右密度為宜。收集細(xì)胞前一天晚上更換新鮮培養(yǎng)基。

胰酶消化細(xì)胞后用預(yù)冷的PBS洗兩遍，目的為去除細(xì)胞中殘余的血清。

用PBS或者無血清培養(yǎng)基吹打細(xì)胞沉淀至合適的濃度，一般皮下瘤接種的細(xì)胞量為1-5×10^6個細(xì)胞/支，接種體積為0.1-0.2ml，因此細(xì)胞懸液的濃度為1-5×10^7個細(xì)胞/ml，如若有條件的實驗室，也可以加基質(zhì)膠以加速瘤塊的生成，基質(zhì)膠與PBS或無血清的比列為1:1。

細(xì)胞消化后應(yīng)盡快接種到裸鼠皮下，一般盡量在半小時內(nèi)完成（如果接種量大，可以分批接種），途中將細(xì)胞懸液放在冰上降低細(xì)胞的代謝以保持細(xì)胞的活性。

選擇的裸鼠一般在4-6周齡，體重16-18g左右，種植部位選擇血供豐富區(qū)域，如腋窩中后部。

接種前用槍將細(xì)胞懸液充分的吹散，防止細(xì)胞成團(tuán)而降低細(xì)胞成活率，并且導(dǎo)致小鼠接種細(xì)胞數(shù)量的差異過大。

成瘤實驗操作步驟 /Operating procedure

接種時選擇好部位進(jìn)針，選擇血管豐富且容易操作的部位接種，如腋下、腹股溝、側(cè)腹部及頸背部等部位都是較好操作的部位。

接種前用75%酒精棉球擦拭消毒進(jìn)針位置，左手抓取固定裸鼠，于裸鼠左側(cè)腋窩處皮下注射，接種時，針頭在皮下進(jìn)針深一點，約1cm深，以減少注射時漏液和污染的可能性，注射前針頭稍微動一動，以便細(xì)胞接種成團(tuán)，減少注射后細(xì)胞懸液從針眼溢出。

接種體積為100μL-200μL，可看見明顯鼓包。(這一過程盡量在半小時內(nèi)完成，途中細(xì)胞懸液放在冰上以減緩細(xì)胞凋亡及防止出現(xiàn)凝膠現(xiàn)象。）

接種后1-2周左右可以見到皮下開始出現(xiàn)腫塊。

注意要點

根據(jù)腫瘤細(xì)胞的特性和接種細(xì)胞的量，一般皮下成瘤的周期為1-2個月。腫瘤不宜生長過大，一般不要超過2000mm3。

腫瘤大小測量一般為1周兩次，游標(biāo)卡尺測量腫瘤最長和最短部位。V=1/2*a*b2 (a為長軸，b為短軸)。

皮下瘤取下后一部分凍液氮用作以后提蛋白和RNA，一部分福爾馬林固定用做免疫組化、免疫熒光等。

主營項目

1. 動物實驗

動物飼養(yǎng)、疾病造模、行為學(xué)檢測、心功能、無創(chuàng)血壓、血常規(guī)、全自動生化檢測等

2. 細(xì)胞實驗

CCK8/MTT、原代細(xì)胞分離、流式細(xì)胞實驗、細(xì)胞劃痕、侵襲、遷移、EDU染色、轉(zhuǎn)染、穩(wěn)定株

3. 分子生物學(xué)

PCR檢測、熒光定量PCR、絕對定量PCR、端粒酶長度、pull down、雙熒光素酶、SSR、SNP檢測等

4. 蛋白實驗

WB、Co-IP、酵母雙雜

5. 病理實驗

HE染色、免疫組學(xué)、電鏡

6. 生理生化實驗

肝腎功能、抗氧化、免疫反應(yīng)等生理免疫指標(biāo);動植物營養(yǎng)指標(biāo)、微量元素、重金屬、酶活等。

7. 多組學(xué)實驗

基因組、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、蛋白組、代謝組、微生物多樣性、宏基因組、生信分析

8. 整體課題實驗

方案設(shè)計、整體實驗交付、標(biāo)書寫作、論文潤色、協(xié)助投稿

聯(lián)系我們

康旭禾生物提供包括動物實驗、細(xì)胞實驗、分子實驗、病理實驗、流式檢測實驗及論文翻譯、潤色、投稿輔助等相關(guān)的各項服務(wù)。

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