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外泌體專題系列又來啦，先前我們一起研究分享了外泌體的分離提取與鑒定，那接下來我們要知道，外泌體作為傳遞重要信息的載體，它最終又哪去了呢？這不，科學(xué)家們紛紛想出奇招，給外泌體添加了各種“GPS定位系統(tǒng)”標(biāo)記它的行蹤，今天我們就一起了解下外泌體的示蹤方法，了解這些方法是如何帶我們探究外泌體的生物分布、生理功能、遷移和靶向機(jī)制的~

先來向大家介紹一下目前比較常見的外泌體示蹤方法~

一、親脂性熒光染料示蹤外泌體

目前常用的親脂性熒光染料包括DiO、Dil、DiR、DiD、PKH26、PKH67等，顧名思義，這些熒光染料可以穩(wěn)定的與細(xì)胞膜脂質(zhì)區(qū)和其他脂溶性生物結(jié)構(gòu)相結(jié)合，結(jié)合后熒光強(qiáng)度大大增強(qiáng)且穩(wěn)定，下面小編展示了使用這類染料對外泌體標(biāo)記的文獻(xiàn)結(jié)果圖片。

1、DiO

在癌細(xì)胞缺氧研究中，作者使用DiO標(biāo)記外泌體，下圖熒光顯微鏡觀察了缺氧癌細(xì)胞對四種不同處理來源的外泌體攝取情況，其中綠色熒光標(biāo)記的即為外泌體。

圖1 DiO染料將外泌體標(biāo)記為綠色

（圖片來源：PMID_29890363）

2、Dil

自噬與外泌體在腦輻射所致的急性肺損傷研究中，Dil染料將外泌體染成紅色熒光，如下圖，從結(jié)果圖上看，外泌體被星形膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)化。

圖2 Dil染料將外泌體標(biāo)記為紅色

（圖片來源：PMID_29104495）

3、DiR

在血液外泌體研究中，給小鼠靜脈注射DiR標(biāo)記的外泌體后，可掃描分析小鼠體內(nèi)各部分DiR信號，從而進(jìn)行相關(guān)機(jī)制分析。

圖3 DiR染料標(biāo)記外泌體進(jìn)行活體成像檢測

（圖片來源：PMID_30429877）

、PKH67

在研究人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞治療腎纖維化的報道中，將人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體通過尾靜脈注射UUO模型小鼠體內(nèi)，通過熒光顯微鏡觀察到UUO模型小鼠腎臟中外泌體被PKH67標(biāo)記成綠色。

圖4 PKH67染料將外泌體標(biāo)記為綠色

（圖片來源：PMID_32802201）

親脂性熒光染料示蹤外泌體由于操作簡單，對檢測儀器要求不高等優(yōu)勢近年來被廣泛應(yīng)用，但由于親脂性熒光染料的特性，通常僅適用于純化的外泌體，且無法追蹤外泌體在細(xì)胞間的移動過程。隨著技術(shù)手段的升級，越來越多的新方法出現(xiàn)在大眾的視野中~

二、MPI體內(nèi)追蹤納米（SPIO）示蹤外泌體

MPI磁性粒子成像系統(tǒng)是基于功能和斷層影像技術(shù)檢測磁性納米顆?？臻g分布的示蹤方法。使用臨床認(rèn)證的超順磁性氧化鐵納米顆粒（SPIONs）作為示蹤劑，有效提升了分辨率。近兩年MPI在生命科學(xué)各個領(lǐng)域的應(yīng)用研究都有著不錯的進(jìn)展。其應(yīng)用領(lǐng)域包括細(xì)胞追蹤、炎癥追蹤、藥物遞送與檢測、血池造影、腫瘤檢測等各個領(lǐng)域。

在體內(nèi)外泌體示蹤實驗中，結(jié)果顯示，通過用SPIO標(biāo)記的細(xì)胞和外泌體具有明顯不同的顏色，且MPI信號與外泌體數(shù)量成正相關(guān)（圖5）。

圖5 SPIO標(biāo)記細(xì)胞和外泌體的肉眼觀察及MPI成像

（圖片來源：PMID_29890363）

圖6中，首先TEM結(jié)果顯示SPIO納米顆粒成功的進(jìn)入外泌體中，NanoSight納米顆粒分析儀顯示SPIO納米顆粒標(biāo)記后外泌體大小沒有顯著差異，MPI和Micro CT圖像顯示了健康小鼠外泌體的體內(nèi)分布。

圖6 SPIO標(biāo)記外泌體進(jìn)行活體成像檢測

（圖片來源：PMID_29890363）

除上述外泌體示蹤外，隨著研究的深入，學(xué)者們直接追蹤到外泌體內(nèi)容物進(jìn)行檢測，將外泌體與轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)聯(lián)系起來，為疾病的診斷和治療帶來重大改變，讓我們一起開開眼界觀摩一下學(xué)者們的智慧結(jié)晶！

一、液滴數(shù)字PCR示蹤外泌體內(nèi)容物

該方法是一種雙靶點特異性適體識別激活外泌體膜上原位連接系統(tǒng)結(jié)合液滴數(shù)字PCR（ddPCR）的TRACER策略對腫瘤來源的外泌體PD-L1（Exo-PD-L1）進(jìn)行精確定量分析。利用適配子的高親和力、雙適配子識別的優(yōu)良選擇性和ddPCR的高靈敏度，該方法以非水洗方式追蹤腫瘤來源的Exo-PD-L1方面表現(xiàn)出顯著的靈敏度和選擇性。由于出色的敏感性，TRACER策略檢測的腫瘤源性Exo-PD-L1水平能夠有效區(qū)分癌癥患者，首次確定作為腫瘤診斷標(biāo)志物，Exo-PD-L1的水平檢測比總Exo-PD-L1水平更可靠。

、高保真納米探針（fLIGHT）示蹤外泌體內(nèi)容物

該方法設(shè)計了四面體納米探針（fLIGHT），該探針可有效進(jìn)入外泌體樣小細(xì)胞外囊泡（sEVs），不僅不破壞sEVs結(jié)構(gòu)，而且不會被sEVs內(nèi)酶降解。進(jìn)入sEVs后，fLIGHT結(jié)合發(fā)卡探針與靶標(biāo)miRNA特異性互補(bǔ)，直接實現(xiàn)了sEVs內(nèi)miRNA分子表達(dá)豐度的原位檢測，成功建立了一種sEVs內(nèi)miRNA分子在體可視化檢測技術(shù)平臺。

主營項目

1. 動物實驗

動物飼養(yǎng)、疾病造模、行為學(xué)檢測、心功能、無創(chuàng)血壓、血常規(guī)、全自動生化檢測等

2. 細(xì)胞實驗

CCK8/MTT、原代細(xì)胞分離、流式細(xì)胞實驗、細(xì)胞劃痕、侵襲、遷移、EDU染色、轉(zhuǎn)染、穩(wěn)定株

3. 分子生物學(xué)

PCR檢測、熒光定量PCR、絕對定量PCR、端粒酶長度、pull down、雙熒光素酶、SSR、SNP檢測等

4. 蛋白實驗

WB、Co-IP、酵母雙雜

5. 病理實驗

HE染色、免疫組學(xué)、電鏡

6. 生理生化實驗

肝腎功能、抗氧化、免疫反應(yīng)等生理免疫指標(biāo);動植物營養(yǎng)指標(biāo)、微量元素、重金屬、酶活等。

7. 多組學(xué)實驗

基因組、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、蛋白組、代謝組、微生物多樣性、宏基因組、生信分析

8. 整體課題實驗

方案設(shè)計、整體實驗交付、標(biāo)書寫作、論文潤色、協(xié)助投稿

聯(lián)系我們

康旭禾生物提供包括動物實驗、細(xì)胞實驗、分子實驗、病理實驗、流式檢測實驗及論文翻譯、潤色、投稿輔助等相關(guān)的各項服務(wù)。

聯(lián)系方式：15579126092      

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