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No.1

實驗原理

小鼠心臟灌流實驗，依托血液循環(huán)系統(tǒng)，向體循環(huán)注入固定液或生理鹽水，以此清除血液并固定組織。該方法可有效消除血液對后續(xù)組織切片、免疫染色、基因測序等實驗的干擾，同時維持組織的形態(tài)與結(jié)構(gòu)完整性。

No.2

實驗材料

耗材：1mL 注射器、輸液器針頭、止血鉗、鑷子、剪刀、導(dǎo)管，以及眼科鑷、精細(xì)剪等解剖工具。

試劑：生理鹽水、4% 多聚甲醛固定液、1.25% 三溴乙醇麻醉劑。

設(shè)備：蠕動泵、解剖臺。

No.3

實驗步驟

實驗流程依次為：麻醉小鼠→固定小鼠→打開胸腔→生理鹽水灌流→固定液灌流→組織取材。

麻醉小鼠：精確稱量小鼠體重，按照 0.2mL/10g 的劑量注射 1.25% 三溴乙醇，每只小鼠注射量約 0.6mL。通常在 5 分鐘內(nèi)可實現(xiàn)完全麻醉，麻醉效果能維持 30 分鐘。

固定小鼠：確認(rèn)小鼠進(jìn)入深度麻醉狀態(tài)（捏尾尖或腳趾無反應(yīng)）后，將其四肢的掌根與腳跟部位牢固固定在解剖臺上，防止因小鼠掙扎而導(dǎo)致固定松動。

打開胸腔：先濕潤小鼠腹部毛發(fā)，用鑷子提起腹部皮膚，小心剪開腹部（注意避開臟器與腸道），隨后剪開橫隔膜（避免損傷肺臟），再剪斷肋骨，充分暴露心臟。

生理鹽水灌流：剪開右心耳，將輸液器針頭從心尖準(zhǔn)確刺入左心室，以 15mL/min 的流速灌注生理鹽水，持續(xù)約 3 分鐘。

固定液灌流：觀察到小鼠肝臟和爪子變白，表明血液已清除干凈。此時，再灌注約 1 分鐘生理鹽水后，更換為 4% 多聚甲醛固定液。以 10mL/min 的速度灌注固定液，持續(xù)約 5 分鐘。在此過程中，若觀察到小鼠肌肉收縮、尾巴擺動，說明灌流環(huán)路通暢。

組織取材：待小鼠肝臟和四肢變硬，即表示灌流完成。小心剪取所需組織，若組織表面有殘留血液，用生理鹽水沖洗干凈，然后轉(zhuǎn)移至 4% 多聚甲醛固定液中保存。建議保存時間不超過 1 周，以免組織自發(fā)熒光增強(qiáng)，影響后續(xù)實驗。

No.4

注意事項

進(jìn)針方向：在左心室進(jìn)針時，務(wù)必確保針頭精準(zhǔn)進(jìn)入左心室，避免刺穿心室間隔進(jìn)入右心室。

灌流速度：灌流速度不宜過快，防止灌流液流入肺臟，影響實驗效果。

組織保存：灌流后的組織需及時置于 4℃固定液中保存，防止組織降解。實驗過程中應(yīng)采用體循環(huán)，因為肺循環(huán)易導(dǎo)致血液殘留，實驗效果不如體循環(huán)理想。

附：

體循環(huán)路徑：左心室→主動脈→全身各級動脈→毛細(xì)血管網(wǎng)→各級靜脈→上、下腔靜脈→右心房

肺循環(huán)路徑：右心室→肺動脈→肺部毛細(xì)血管網(wǎng)→肺靜脈→左心房

No.5

參考資料

[1] 黃維,楊曉蘭,馬育,等.交聯(lián)瓊脂包嵌凹凸棒微囊重復(fù)大鼠血液灌流中生物相容性的初探[J].第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報,2003,(12):1079-1081.

[2] Rana A, Massa PT, Chen XJ. A Gravity-Fed Transcardial Perfusion Method for Histologic Analysis of the Mouse Central Nervous System. J Vis Exp. 2022;(179):10.3791/63386.

主營項目

1. 動物實驗

動物飼養(yǎng)、疾病造模、行為學(xué)檢測、心功能、無創(chuàng)血壓、血常規(guī)、全自動生化檢測等

2. 細(xì)胞實驗

CCK8/MTT、原代細(xì)胞分離、流式細(xì)胞實驗、細(xì)胞劃痕、侵襲、遷移、EDU染色、轉(zhuǎn)染、穩(wěn)定株

3. 分子生物學(xué)

PCR檢測、熒光定量PCR、絕對定量PCR、端粒酶長度、pull down、雙熒光素酶、SSR、SNP檢測等

4. 蛋白實驗

WB、Co-IP、酵母雙雜

5. 病理實驗

HE染色、免疫組學(xué)、電鏡

6. 生理生化實驗

肝腎功能、抗氧化、免疫反應(yīng)等生理免疫指標(biāo);動植物營養(yǎng)指標(biāo)、微量元素、重金屬、酶活等。

7. 多組學(xué)實驗

基因組、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、蛋白組、代謝組、微生物多樣性、宏基因組、生信分析

8. 整體課題實驗

方案設(shè)計、整體實驗交付、標(biāo)書寫作、論文潤色、協(xié)助投稿

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康旭禾生物提供包括動物實驗、細(xì)胞實驗、分子實驗、病理實驗、流式檢測實驗及論文翻譯、潤色、投稿輔助等相關(guān)的各項服務(wù)。

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