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在熒光定量 PCR（qPCR）技術(shù)中，qPCR 擴(kuò)增曲線與 Ct 值（或Cq值）是理解和分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果的核心要素。它們就像一把鑰匙，為我們解鎖基因表達(dá)量的秘密，在生命科學(xué)研究和臨床診斷等領(lǐng)域發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。   

  qPCR通過熒光染料或探針與擴(kuò)增的雙鏈DNA結(jié)合，產(chǎn)生熒光信號(hào)。機(jī)器實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)熒光信號(hào)變化，反映DNA擴(kuò)增的數(shù)量。通過分析熒光信號(hào)的強(qiáng)度，可以定量分析樣品中的目標(biāo)基因。PCR指數(shù)擴(kuò)增過程當(dāng)中，產(chǎn)物量與循環(huán)數(shù)之間的關(guān)系是：擴(kuò)增產(chǎn)物量f(x)=起始模板量S×（1+E）^循環(huán)個(gè)數(shù)n。

2、什么是擴(kuò)增曲線

定義：擴(kuò)增曲線是描述PCR動(dòng)態(tài)進(jìn)程的曲線，以循環(huán)數(shù)為橫坐標(biāo)，以反應(yīng)過程中實(shí)時(shí)熒光信號(hào)強(qiáng)度為縱坐標(biāo)。擴(kuò)增曲線可以分成四個(gè)時(shí)期：基線期，指數(shù)期，線性期，平臺(tái)期。

擴(kuò)增曲線常以線性圖譜和對(duì)數(shù)圖譜兩種形式展現(xiàn)。

線性圖譜：以 PCR 循環(huán)數(shù)為橫坐標(biāo)，熒光信號(hào)強(qiáng)度為縱坐標(biāo)，直接呈現(xiàn)熒光信號(hào)隨循環(huán)數(shù)增加的變化情況。

對(duì)數(shù)圖譜：以 PCR 循環(huán)數(shù)為橫坐標(biāo)，熒光信號(hào)強(qiáng)度的對(duì)數(shù)為縱坐標(biāo)，突出指數(shù)增長(zhǎng)期的特征，此階段曲線會(huì)呈現(xiàn)為一條直線。  

對(duì)數(shù)圖譜  

線性圖譜

2、什么是CT值（Cq值）

 定義： PCR擴(kuò)增過程中，擴(kuò)增產(chǎn)物的熒光信號(hào)達(dá)到設(shè)定的熒光閾值時(shí)的所對(duì)應(yīng)的擴(kuò)增循環(huán)數(shù)（Cycle Threshold）。C代表Cycle，T代表Threshold。

閾值（threshold）：在擴(kuò)增曲線的指數(shù)增長(zhǎng)區(qū)域內(nèi)，選擇任意適當(dāng)位置設(shè)定的熒光檢出界限。

熒光閾值一般由儀器自動(dòng)設(shè)置，也可以手動(dòng)設(shè)置。熒光域值閾值線的缺省設(shè)置通常是PCR擴(kuò)增前3-15個(gè)循環(huán)的熒光信號(hào)標(biāo)準(zhǔn)偏差的10倍。

同一次反應(yīng)中對(duì)于不同的基因可單獨(dú)設(shè)置閾值，但對(duì)于同一個(gè)基因擴(kuò)增一定要設(shè)置相同的閾值。

3、為什么要有CT值
   3.1Ct值具有重現(xiàn)性：同一模板不同時(shí)間擴(kuò)增或同一時(shí)間不同管內(nèi)擴(kuò)增，得到的Ct值是恒定的。

注：模板為10^5k拷貝GAPDH，用GAPDH引物擴(kuò)增。96個(gè)孔重復(fù)結(jié)果的Ct平均值為19.1，變異系數(shù)（Cv）=0.002.   3.2Ct值與起始模板的線性關(guān)系：由于Ct值與起始模板的對(duì)數(shù)存在線性關(guān)系，可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知樣品進(jìn)行定量測(cè)定。

主營(yíng)項(xiàng)目

1. 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

動(dòng)物飼養(yǎng)、疾病造模、行為學(xué)檢測(cè)、心功能、無創(chuàng)血壓、血常規(guī)、全自動(dòng)生化檢測(cè)等

2. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

CCK8/MTT、原代細(xì)胞分離、流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞劃痕、侵襲、遷移、EDU染色、轉(zhuǎn)染、穩(wěn)定株

3. 分子生物學(xué)

PCR檢測(cè)、熒光定量PCR、絕對(duì)定量PCR、端粒酶長(zhǎng)度、pull down、雙熒光素酶、SSR、SNP檢測(cè)等

4. 蛋白實(shí)驗(yàn)

WB、Co-IP、酵母雙雜

5. 病理實(shí)驗(yàn)

HE染色、免疫組學(xué)、電鏡

6. 生理生化實(shí)驗(yàn)

肝腎功能、抗氧化、免疫反應(yīng)等生理免疫指標(biāo);動(dòng)植物營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)、微量元素、重金屬、酶活等。

7. 多組學(xué)實(shí)驗(yàn)

基因組、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、蛋白組、代謝組、微生物多樣性、宏基因組、生信分析

8. 整體課題實(shí)驗(yàn)

方案設(shè)計(jì)、整體實(shí)驗(yàn)交付、標(biāo)書寫作、論文潤(rùn)色、協(xié)助投稿

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