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細(xì)胞凋亡之Hoechst染色實(shí)驗(yàn)       

 細(xì)胞凋亡是指為維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，由基因控制的細(xì)胞自主的有序的死亡。細(xì)胞凋亡與細(xì)胞壞死不同，細(xì)胞凋亡不是一件被動(dòng)的過(guò)程，而是主動(dòng)過(guò)程，它涉及一系列基因的激活、表達(dá)以及調(diào)控等的作用，它并不是病理?xiàng)l件下，自體損傷的一種現(xiàn)象，而是為更好地適應(yīng)生存環(huán)境而主動(dòng)爭(zhēng)取的一種死亡過(guò)程。

實(shí)驗(yàn)原理

Hoechst 33258和Hoechst 33342均為非嵌入性熒光染料，它們?cè)诨罴?xì)胞中DNA聚AT序列富集區(qū)域的小溝處與DNA結(jié)合?；罴?xì)胞或固定細(xì)胞均可從低濃度溶液中攝取該染料，從而使細(xì)胞核著色，故又把此類染料稱為DNA探針。Hoechst 33342和Hoechst 33258均可溶于水并在水溶液中保持穩(wěn)定。Hoechst-DNA的激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)分別550 nm和460 nm。在熒光顯微鏡紫外光激發(fā)時(shí)，Hoechst-DNA發(fā)出亮藍(lán)色熒光。Hoechst染色是熒光染色中的一種類型，專門用來(lái)在熒光顯微觀察下標(biāo)示DNA，由于可將DNA標(biāo)示，此種染色方式也可以用來(lái)辨識(shí)內(nèi)含DNA的細(xì)胞核及線粒體的位置。

實(shí)驗(yàn)步驟?

（1）取處理后的各組樣本，加入1 mL 4％多聚甲醛室溫固定20 min，棄去固定液，加入1 mL PBS清洗兩次，每次3 min，棄去PBS；

（2）加入1 mL Hoechst 33258染色液，室溫染色5 min；

（3）棄掉染色液用PBS清洗五遍，每次3 min，最后加入1 mL PBS；

（4）熒光顯微鏡下觀察并拍照。

凋亡的細(xì)胞核染色增強(qiáng)，熒光更為明亮，呈圓狀或固縮狀、團(tuán)塊狀結(jié)構(gòu)。非凋亡細(xì)胞核呈熒光深淺不一的結(jié)構(gòu)樣特征。二者形態(tài)相異，易區(qū)分辨別。

注意事項(xiàng)

Hoechst染色液需避光保存。

加入工作液后盡量當(dāng)天完成拍攝避免染料淬滅影響。

如有需要，請(qǐng)聯(lián)系我們~

主營(yíng)項(xiàng)目

1. 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

動(dòng)物飼養(yǎng)、疾病造模、行為學(xué)檢測(cè)、心功能、無(wú)創(chuàng)血壓、血常規(guī)、全自動(dòng)生化檢測(cè)等

2. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

CCK8/MTT、原代細(xì)胞分離、流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞劃痕、侵襲、遷移、EDU染色、轉(zhuǎn)染、穩(wěn)定株

3. 分子生物學(xué)

PCR檢測(cè)、熒光定量PCR、絕對(duì)定量PCR、端粒酶長(zhǎng)度、pull down、雙熒光素酶、SSR、SNP檢測(cè)等

4. 蛋白實(shí)驗(yàn)

WB、Co-IP、酵母雙雜

5. 病理實(shí)驗(yàn)

HE染色、免疫組學(xué)、電鏡

6. 生理生化實(shí)驗(yàn)

肝腎功能、抗氧化、免疫反應(yīng)等生理免疫指標(biāo);動(dòng)植物營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)、微量元素、重金屬、酶活等。

7. 多組學(xué)實(shí)驗(yàn)

基因組、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、蛋白組、代謝組、微生物多樣性、宏基因組、生信分析

8. 整體課題實(shí)驗(yàn)

方案設(shè)計(jì)、整體實(shí)驗(yàn)交付、標(biāo)書寫作、論文潤(rùn)色、協(xié)助投稿

聯(lián)系我們

康旭禾生物提供包括動(dòng)物實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)、分子實(shí)驗(yàn)、病理實(shí)驗(yàn)、流式檢測(cè)實(shí)驗(yàn)及論文翻譯、潤(rùn)色、投稿輔助等相關(guān)的各項(xiàng)服務(wù)。

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