波多野结衣中文字幕一区二区三区,色综合救久久无码中文幕波多,日韩一区二区高清视频在线观看,极品身材高颜值在线播放,一本一道久久成人网站

在醫(yī)學研究中，心肌梗死模型是一種重要工具，能夠幫助科學家深入理解心肌梗塞的病理生理機制和治療方法的發(fā)展。通過模擬心肌梗塞的發(fā)生過程，研究人員可以更精確地探索疾病的發(fā)病機制、評估治療效果，進而推動臨床實踐的進步。
本文將從心肌梗死的疾病背景出發(fā)，詳細探討其發(fā)病機制，綜述近年來在動物模型方面的研究進展，重點介紹小鼠心肌梗死模型的手術步驟及操作要點，并對模型的表型評價方法進行詳細分析，旨在為相關研究提供參考。

心肌梗死疾病背景

心肌梗死（myocardial infarction，MI）是冠狀動脈血管堵塞導致心肌缺血缺氧的一種心血管疾病，可導致心律失常、心力衰竭、致死等嚴重后果，嚴重威脅人類生命健康。根據(jù)流行病學調查顯示，急性心肌梗死（AMI）的發(fā)病率各地報道不一，我國AMI的發(fā)病年齡有年輕化的趨勢，農村發(fā)病率高于城市發(fā)病率，死亡率呈整體上升趨勢。

發(fā)病原因

血栓形成

①　動脈粥樣硬化和炎癥

②　斑塊破裂

③　斑塊侵蝕

④　鈣化結節(jié)

圖中：心肌梗死/圖片素材來自：scientificanimations

非動脈粥樣硬化引起的心肌梗死

①　冠狀動脈栓塞

②　全身性低血壓

③　需氧量增加

④　自發(fā)性冠狀動脈夾層

⑤　冠狀動脈痙攣

塔卡亞薩動脈炎和巨細胞動脈炎也可引起心肌梗死

模型研究進展

1、模型動物：大鼠、兔、犬、小鼠、小型豬、貓、猴等都可用于制作心肌梗死模型，其中大鼠和小鼠因來源保證、價格低廉、操作簡單等特點應用廣泛。

實驗研究中心肌梗死的造模方法主要有以下幾種：

心肌梗死動物模型特點比較

小鼠心臟解剖

小鼠心肌梗死詳細手術步驟

小鼠冠狀動脈結扎法制備心肌梗死模型

1、動物：C57小鼠，SPF級，雄性，8 - 10W，24 - 27g。

2、試劑：三溴乙醇、伊文思藍、2,3,5 - 氯化三苯基四氮唑、0.9%氯化鈉注射液。

3、儀器設備：手術顯微鏡、呼吸機、呼吸管路、體溫反饋加熱板。

4、操作步驟：

① 麻醉和術前準備：小鼠適應性喂養(yǎng)一周后用于實驗，按500mg/kg腹腔注射三溴乙醇溶液麻醉，前頸部和左胸部備皮，進行氣管插管。呼吸頻率100次/min，通氣量初始10ml/min，逐步增加至25ml/min，以控制自主呼吸，氣道壓力15cmH2O,  PEEP,1cmH2O。

② 開胸：小鼠采用右側臥位，固定好四肢，對手術區(qū)皮膚進行消毒清潔，剪開皮膚，逐層分離筋膜、肌肉等組織，暴露第3、4肋間，打開胸腔充分暴露心臟，撕開心包，充分暴露左冠狀動脈前降支（LAD）或所在區(qū)域。

③ 結扎LAD：顯微鏡下找到LAD走向或可能所在位置，持針器持取7 - 0帶針縫合線，以左心耳下緣為標志，平行于左心耳下緣2mm處進針，縫線穿過LAD后結扎以完全阻斷LAD血流，結扎后觀察左室前壁變化，無出血后用6 - 0縫線逐層縫合關閉胸腔，抽取1 - 2ml氣體恢復胸腔負壓，最后縫合皮膚。

手術過程-冠脈結扎：

手術過程-關胸：

實驗觀察及護理

術后密切關注小鼠狀態(tài)，待小鼠自然蘇醒后將其從呼吸機上取下并取下氣管插管，放入干凈的飼養(yǎng)籠，密切關注小鼠術后狀態(tài)，飲食飲水情況以及死亡情況并做好相應記錄。

影響模型成功的關鍵因素

1.氣管插管時要清理氣道口的粘液異物，防止呼吸道阻塞。

3.選擇合適的結扎位置：結扎位置過高，易導致室顫而死亡，而結扎位置過低不能形成確切的心梗。結扎的深淺也很重要，結扎太深易穿透心肌組織，造成出血死亡；太淺有可能只穿透心臟表層，而未結扎冠狀動脈前降支，只對心肌造成損傷。一般的進針深度（0.5 - 1）mm即可。

4.結扎時動物要快，準，時間太長會影響心臟的射血，增加發(fā)生心律失常的機會。

5.結扎完后要及時排氣，可以有效避免術后呼吸困難，提高成活率。

心肌梗死模型表型評價

術后生存率觀察

術后每天定時觀察小鼠的存活狀況，發(fā)現(xiàn)死亡小鼠及時記錄并解剖死亡原因，持續(xù)觀察28天，將記錄的結果制作生存曲線。術后小鼠的生存率大概在50%左右，一般在術后一周內發(fā)生死亡，一周后的存活率比較穩(wěn)定。

小鼠術后存活率

心電圖檢測

本實驗結扎前心電圖呈正常表現(xiàn)，阻斷LAD后即刻出現(xiàn)S - T段持續(xù)性抬高，R波振幅降低，T波高聳，說明造模成功。

血清心肌酶譜、肌紅蛋白和肌鈣蛋白含量測定

分別于術前、術后6h靜脈采血，測定谷草轉氨酶（AST）、乳酸脫氫酶（LDH）、磷酸肌酸激酶（CK）、肌鈣蛋白、肌紅蛋白。結果顯示，結扎后6h血清心肌酶譜改變，血清心肌酶譜AST、LDH、CK與術前自身對照均有明顯升高（P < 0.01），肌紅蛋白和肌鈣蛋白呈陽性。

超聲心動圖檢查

分別于術前，術后1w行二維及M型超聲心動圖檢查，評價小鼠左室功能，檢測舒張末期左室內徑（LVDd）、收縮末期左室內徑（LVDs）、左室后壁舒張末期厚度（PWTd）、左室后壁收縮末期厚度（PWTs）、左室前壁舒張末期厚度（AWTd）、左室前壁收縮末期厚度（AWTs）、射血分數(shù)（EF%）、左室縮短率 （FS%）。

①與假手術組相比，模型組心室壁波形不規(guī)則，心室搏動減弱，EF%和FS%顯著降低，說明造模成功。

②模型組舒張末期左室內徑（LVDd）、收縮末期左室內徑（LVDs）明顯升高。

③左室前壁舒張末期厚度（AWTd）、左室前壁收縮末期厚度（AWTs）明顯下降。左室后壁舒張末期厚度（PWTd）、左室后壁收縮末期厚度（PWTs）有一定程度的升高。 

急性心梗后，小鼠的左心室壁厚度會增厚，發(fā)揮代償性和保護功能，但最終會失代償，左心室壁厚度會變薄。

病理學檢測

標本經脫水、包埋、切片后經HE、Masson、Tunel、TTC+Evens Blue等染色，檢測心臟不同區(qū)域組織細胞結構變化。

①HE染色

可見MI組心肌組織呈區(qū)域性變性壞死，梗死面積隨時間而增加，病變區(qū)肌纖維排列紊亂，肌絲斷裂溶解，橫紋不清，細胞核固縮，有核周空泡形成。肌纖維間有纖維素滲出，纖維母細胞形成和出芽毛細血管，炎癥細胞浸潤。

②Masson染色

可見MI組的左心室腔明顯增大，心室壁變薄，纖維化面積增加。

③Tunel 檢測

可見MI組小鼠心肌細胞術后3d，1w和4w可見明顯的明顯的細胞凋亡，凋亡小體數(shù)量增多，心肌梗死嚴重。

④TTC+Evens Blue染色

可見MI組的梗死面積占左室的30%左右。

心臟壓力容積檢測

1、重點關注指標

①室內壓最大上升速率和最大下降速率（dP/dtmax和-dP/dtmin）

②每搏輸出量(SV)

③壓力容積環(huán)包圍的面積是每搏功(SW)

④射血分數(shù)(EF)

⑤收縮末期倒電容(Ees)

②左心室壓力容積檢測：

③檢測結果：

可見MI組容積變大，前負荷增加，射血分數(shù)降，低每博輸出量降低；壓力容積環(huán)面積下降，每博功減少；等容收縮期壓力下降，心肌收縮力減弱；室內壓最大上升速率降低；射血末期壓力下降，ESPVR下降。

主營項目

1. 動物實驗

動物飼養(yǎng)、疾病造模、行為學檢測、心功能、無創(chuàng)血壓、血常規(guī)、全自動生化檢測等

2. 細胞實驗

CCK8/MTT、原代細胞分離、流式細胞實驗、細胞劃痕、侵襲、遷移、EDU染色、轉染、穩(wěn)定株

3. 分子生物學

PCR檢測、熒光定量PCR、絕對定量PCR、端粒酶長度、pull down、雙熒光素酶、SSR、SNP檢測等

4. 蛋白實驗

WB、Co-IP、酵母雙雜

5. 病理實驗

HE染色、免疫組學、電鏡

6. 生理生化實驗

肝腎功能、抗氧化、免疫反應等生理免疫指標;動植物營養(yǎng)指標、微量元素、重金屬、酶活等。

7. 多組學實驗

基因組、轉錄調控、蛋白組、代謝組、微生物多樣性、宏基因組、生信分析

8. 整體課題實驗

方案設計、整體實驗交付、標書寫作、論文潤色、協(xié)助投稿

聯(lián)系我們

康旭禾生物提供包括動物實驗、細胞實驗、分子實驗、病理實驗、流式檢測實驗及論文翻譯、潤色、投稿輔助等相關的各項服務。

聯(lián)系方式：15579126092      

公司官網：http://consurebio.com/

公司地址：江西省南昌市南昌縣小藍VR產業(yè)基地D座2樓