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一、常見的內(nèi)參抗體

1.β-actin（42 kDa）

特點(diǎn)：β-actin 是細(xì)胞骨架的重要組成部分，廣泛存在于大多數(shù)細(xì)胞和組織中，其表達(dá)相對穩(wěn)定，且與眾多目標(biāo)蛋白的分子量差異較大，便于在 Western blot 實(shí)驗(yàn)中區(qū)分。

局限性：在肌肉組織中，β-actin 的高表達(dá)可能影響內(nèi)參的準(zhǔn)確性。此外，其聚合狀態(tài)易受細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的影響，從而導(dǎo)致表達(dá)水平發(fā)生變化。因此，在肌肉組織相關(guān)研究或涉及細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的實(shí)驗(yàn)中，建議優(yōu)先選擇其他內(nèi)參抗體，如 GAPDH 或 β-tubulin。

2.GAPDH（36 kDa）

特點(diǎn)：GAPDH 參與糖酵解等代謝過程，其在多數(shù)細(xì)胞和組織中表達(dá)較為穩(wěn)定，且與多數(shù)目標(biāo)蛋白的分子量差異較大，便于在 Western blot 實(shí)驗(yàn)中區(qū)分。此外，GAPDH 的價格適中，是常用的內(nèi)參抗體之一。

局限性：在特定條件下，如缺氧等，GAPDH 的表達(dá)可能會發(fā)生改變。此外，若研究涉及糖代謝相關(guān)領(lǐng)域，GAPDH 的表達(dá)變化可能會影響內(nèi)參的準(zhǔn)確性。在這種情況下，建議選擇 β-actin 作為替代內(nèi)參抗體。

3.β-tubulin（55 kDa）

特點(diǎn)：β-tubulin 是細(xì)胞微管結(jié)構(gòu)的重要組成部分，其表達(dá)相對穩(wěn)定，能夠與不同分子量的目標(biāo)蛋白區(qū)分，適用于細(xì)胞骨架相關(guān)研究。

局限性：β-tubulin 的穩(wěn)定性可能受到藥物處理或細(xì)胞生理狀態(tài)的影響。在某些特殊細(xì)胞類型或疾病模型中，其表達(dá)可能不穩(wěn)定。因此，在這些情況下，GAPDH 可能是更好的選擇。

二、如何選擇內(nèi)參抗體

1.目的蛋白分子量大小

在選擇內(nèi)參抗體時，應(yīng)確保目的蛋白與內(nèi)參蛋白的分子量相差至少5 kDa，以避免在Western blot實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)條帶重疊，從而確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可讀性。

2.目的蛋白的細(xì)胞定位

①胞漿和全細(xì)胞蛋白：可選擇β-actin（42 kDa）、GAPDH或β-tubulin。其中，β-actin在胞漿中表達(dá)高效且穩(wěn)定，但理論上在細(xì)胞核內(nèi)不表達(dá)，因此不能作為核蛋白的內(nèi)參。

②胞核蛋白：可選擇PCNA（GB12010）、Histone H3（GB11102）等，這些蛋白在細(xì)胞核中表達(dá)穩(wěn)定，適合作為核蛋白的內(nèi)參。

③核膜蛋白：可選擇Lamin B1（GB111802），其在核膜中表達(dá)穩(wěn)定，適合作為核膜蛋白的內(nèi)參。

④線粒體蛋白：可選擇COXIV（GB11250）、VDAC1（GB121939）等，這些蛋白在線粒體中表達(dá)穩(wěn)定，適合作為線粒體蛋白的內(nèi)參。

3.組織特異性

在脂肪組織中，β-actin的表達(dá)量較低，不適合作為內(nèi)參抗體。

在腦組織中，β-tubulin的表達(dá)較高，而β-actin的表達(dá)量可能較低，因此建議選擇β-tubulin作為內(nèi)參。

在骨骼肌、心肌和平滑肌中，β-tubulin的表達(dá)可能發(fā)生變化或特化，而GAPDH的表達(dá)相對穩(wěn)定，因此建議選擇GAPDH作為內(nèi)參。

不同組織和細(xì)胞類型對內(nèi)參蛋白的適用性存在差異。例如：

對于其他來源的樣本，如果研究較少，建議參考相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，選擇合適的內(nèi)參蛋白。

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主營項(xiàng)目

1. 動物實(shí)驗(yàn)

動物飼養(yǎng)、疾病造模、行為學(xué)檢測、心功能、無創(chuàng)血壓、血常規(guī)、全自動生化檢測等

2. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

CCK8/MTT、原代細(xì)胞分離、流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞劃痕、侵襲、遷移、EDU染色、轉(zhuǎn)染、穩(wěn)定株

3. 分子生物學(xué)

PCR檢測、熒光定量PCR、絕對定量PCR、端粒酶長度、pull down、雙熒光素酶、SSR、SNP檢測等

4. 蛋白實(shí)驗(yàn)

WB、Co-IP、酵母雙雜

5. 病理實(shí)驗(yàn)

HE染色、免疫組學(xué)、電鏡

6. 生理生化實(shí)驗(yàn)

肝腎功能、抗氧化、免疫反應(yīng)等生理免疫指標(biāo);動植物營養(yǎng)指標(biāo)、微量元素、重金屬、酶活等。

7. 多組學(xué)實(shí)驗(yàn)

基因組、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、蛋白組、代謝組、微生物多樣性、宏基因組、生信分析

8. 整體課題實(shí)驗(yàn)

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