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背景

裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)，是一種用于研究腫瘤發(fā)生和發(fā)展的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。裸鼠是一種無(wú)毛、免疫缺陷的小鼠，在體內(nèi)移植外源性腫瘤細(xì)胞后，由于其免疫系統(tǒng)不完整，不會(huì)對(duì)異物產(chǎn)生免疫反應(yīng)，因此，腫瘤細(xì)胞可以不受抵抗地存活和生長(zhǎng)。

通過(guò)裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)，可以研究腫瘤細(xì)胞在體內(nèi)的生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移、藥物治療等方面的情況，為開(kāi)發(fā)新的腫瘤治療方法和藥物提供重要的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。但是，裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)涉及動(dòng)物權(quán)益和倫理問(wèn)題，需要在符合倫理和法律規(guī)定的條件下進(jìn)行。

實(shí)驗(yàn)室常見(jiàn)成瘤細(xì)胞/Common tumorigenic cells in laboratory

常規(guī)較容易成瘤的細(xì)胞：Hep-G2（肝癌），Hep2（喉癌），NCI-H460(大細(xì)胞肺癌)， A431(表皮癌)，SK-OV-3（卵巢癌），MCF-7（乳腺癌）SKBR3， A375/B16-F10（人黑色素瘤細(xì)胞），SGC7901 人胃腫瘤細(xì)胞 ，KB人口腔表皮樣癌細(xì)胞

成瘤較慢的細(xì)胞：CNE（鼻咽癌），A549（肺癌）， SPC-A-1（肺腺癌）， HT-29（結(jié)腸癌），BEL-7402（肝癌），MDA-MB-231 乳腺癌 ， CT26 （小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞 ），SH-SY5Y (人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞 ) ， U251 （人膠質(zhì)瘤細(xì)胞） ， BGC-823（人胃癌細(xì)胞） ，PC-3 （人前列腺癌細(xì)胞）

一些比較有爭(zhēng)議的細(xì)胞：Hela（宮頸癌），HCT（人回盲腸癌細(xì)胞/人結(jié)直腸癌腺癌細(xì)胞）。其他：BMSC（骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞）

成瘤實(shí)驗(yàn)技巧要點(diǎn) /Key points of skill

細(xì)胞的狀態(tài)是成瘤實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵，所以細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)一定要好，取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，細(xì)胞達(dá)80-90%左右密度為宜。收集細(xì)胞前一天晚上更換新鮮培養(yǎng)基。

胰酶消化細(xì)胞后用預(yù)冷的PBS洗兩遍，目的為去除細(xì)胞中殘余的血清。

用PBS或者無(wú)血清培養(yǎng)基吹打細(xì)胞沉淀至合適的濃度，一般皮下瘤接種的細(xì)胞量為1-5×10^6個(gè)細(xì)胞/支，接種體積為0.1-0.2ml，因此細(xì)胞懸液的濃度為1-5×10^7個(gè)細(xì)胞/ml，如若有條件的實(shí)驗(yàn)室，也可以加基質(zhì)膠以加速瘤塊的生成，基質(zhì)膠與PBS或無(wú)血清的比列為1:1。

細(xì)胞消化后應(yīng)盡快接種到裸鼠皮下，一般盡量在半小時(shí)內(nèi)完成（如果接種量大，可以分批接種），途中將細(xì)胞懸液放在冰上降低細(xì)胞的代謝以保持細(xì)胞的活性。

選擇的裸鼠一般在4-6周齡，體重16-18g左右，種植部位選擇血供豐富區(qū)域，如腋窩中后部。

接種前用槍將細(xì)胞懸液充分的吹散，防止細(xì)胞成團(tuán)而降低細(xì)胞成活率，并且導(dǎo)致小鼠接種細(xì)胞數(shù)量的差異過(guò)大。

成瘤實(shí)驗(yàn)操作步驟 /Operating procedure

接種時(shí)選擇好部位進(jìn)針，選擇血管豐富且容易操作的部位接種，如腋下、腹股溝、側(cè)腹部及頸背部等部位都是較好操作的部位。

接種前用75%酒精棉球擦拭消毒進(jìn)針位置，左手抓取固定裸鼠，于裸鼠左側(cè)腋窩處皮下注射，接種時(shí)，針頭在皮下進(jìn)針深一點(diǎn)，約1cm深，以減少注射時(shí)漏液和污染的可能性，注射前針頭稍微動(dòng)一動(dòng)，以便細(xì)胞接種成團(tuán)，減少注射后細(xì)胞懸液從針眼溢出。

接種體積為100μL-200μL，可看見(jiàn)明顯鼓包。(這一過(guò)程盡量在半小時(shí)內(nèi)完成，途中細(xì)胞懸液放在冰上以減緩細(xì)胞凋亡及防止出現(xiàn)凝膠現(xiàn)象。）

接種后1-2周左右可以見(jiàn)到皮下開(kāi)始出現(xiàn)腫塊。

注意要點(diǎn)

根據(jù)腫瘤細(xì)胞的特性和接種細(xì)胞的量，一般皮下成瘤的周期為1-2個(gè)月。腫瘤不宜生長(zhǎng)過(guò)大，一般不要超過(guò)2000mm3。

腫瘤大小測(cè)量一般為1周兩次，游標(biāo)卡尺測(cè)量腫瘤最長(zhǎng)和最短部位。V=1/2*a*b2 (a為長(zhǎng)軸，b為短軸)。

皮下瘤取下后一部分凍液氮用作以后提蛋白和RNA，一部分福爾馬林固定用做免疫組化、免疫熒光等。

主營(yíng)項(xiàng)目

1. 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

動(dòng)物飼養(yǎng)、疾病造模、行為學(xué)檢測(cè)、心功能、無(wú)創(chuàng)血壓、血常規(guī)、全自動(dòng)生化檢測(cè)等

2. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

CCK8/MTT、原代細(xì)胞分離、流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞劃痕、侵襲、遷移、EDU染色、轉(zhuǎn)染、穩(wěn)定株

3. 分子生物學(xué)

PCR檢測(cè)、熒光定量PCR、絕對(duì)定量PCR、端粒酶長(zhǎng)度、pull down、雙熒光素酶、SSR、SNP檢測(cè)等

4. 蛋白實(shí)驗(yàn)

WB、Co-IP、酵母雙雜

5. 病理實(shí)驗(yàn)

HE染色、免疫組學(xué)、電鏡

6. 生理生化實(shí)驗(yàn)

肝腎功能、抗氧化、免疫反應(yīng)等生理免疫指標(biāo);動(dòng)植物營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)、微量元素、重金屬、酶活等。

7. 多組學(xué)實(shí)驗(yàn)

基因組、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、蛋白組、代謝組、微生物多樣性、宏基因組、生信分析

8. 整體課題實(shí)驗(yàn)

方案設(shè)計(jì)、整體實(shí)驗(yàn)交付、標(biāo)書(shū)寫(xiě)作、論文潤(rùn)色、協(xié)助投稿

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