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細(xì)胞凋亡（apoptosis）是指細(xì)胞在一定的生理或病理?xiàng)l件下，受內(nèi)在遺傳機(jī)制控制，按照自身程序主動(dòng)性、生理性的死亡過程。

細(xì)胞凋亡是細(xì)胞的一種基本生物學(xué)現(xiàn)象，在多細(xì)胞生物去除不需要的或異常的細(xì)胞中起著必要的作用。它在生物體的進(jìn)化、內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定以及多個(gè)系統(tǒng)的發(fā)育中起著重要的作用。細(xì)胞凋亡不僅是一種特殊的細(xì)胞死亡類型，而且具有重要的生物學(xué)意義及復(fù)雜的分子生物學(xué)機(jī)制。

No.1

Annexin V-FITC/PI雙染色法

原理：

利用Annexin V結(jié)合凋亡細(xì)胞外翻的磷脂酰絲氨酸（PS），F(xiàn)ITC標(biāo)記顯綠色熒光；PI（碘化丙啶）穿透死細(xì)胞膜染核顯紅色熒光，區(qū)分早期凋亡（Annexin V+/PI-）和晚期凋亡/壞死（Annexin V+/PI+）。

優(yōu)點(diǎn)：

可區(qū)分早期凋亡與晚期凋亡/壞死。

流式細(xì)胞術(shù)定量，靈敏度高。

缺點(diǎn)：

需新鮮樣本，固定會(huì)導(dǎo)致假陽性。

無法區(qū)分凋亡與鐵死亡（同樣PS外翻）。

No.2

TUNEL

原理：
檢測(cè)DNA斷裂（凋亡特征），末端轉(zhuǎn)移酶將熒光標(biāo)記的dUTP連接到DNA片段3'-OH端。

優(yōu)點(diǎn)：

直接標(biāo)記DNA斷裂，特異性高。

可用于組織切片（如免疫組化）。

缺點(diǎn)：

可能標(biāo)記非凋亡性DNA損傷（如壞死）。

操作復(fù)雜，成本較高。

No.3

Caspase活性檢測(cè)

原理：

檢測(cè)凋亡關(guān)鍵執(zhí)行者Caspase家族（如Caspase-3）的活性，使用熒光底物（如DEVD-AMC）或抗體。

優(yōu)點(diǎn)：

特異性強(qiáng)，與凋亡通路直接相關(guān)。

可區(qū)分不同Caspase亞型。

缺點(diǎn)：

某些情況下Caspase激活不依賴凋亡（如炎癥）。需裂解細(xì)胞，無法單細(xì)胞分析。

No.4

線粒體膜電位檢測(cè)（JC-1/DiOC6）

原理：
熒光染料JC-1在線粒體膜電位（ΔΨm）高時(shí)形成紅色聚集體，電位下降（凋亡早期）時(shí)變?yōu)榫G色單體。

優(yōu)點(diǎn)：

反映早期凋亡事件（早于PS外翻）。

流式或熒光顯微鏡均可檢測(cè)。

缺點(diǎn)：

其他細(xì)胞應(yīng)激（如氧化損傷）也可降低ΔΨm。

JC-1可能對(duì)細(xì)胞有毒性。

No.5

 Hoechst 33342/PI雙染色

原理：
Hoechst 33342穿透活細(xì)胞染核（凋亡細(xì)胞濃縮染色更強(qiáng)），PI僅進(jìn)入死細(xì)胞。

優(yōu)點(diǎn)：

簡(jiǎn)單經(jīng)濟(jì)，可觀察核形態(tài)變化（凋亡小體）。

適合熒光顯微鏡觀察。

缺點(diǎn)：

主觀性強(qiáng)，需經(jīng)驗(yàn)判斷。

Hoechst可能淬滅或毒性。

No.6

DNA Ladder（瓊脂糖凝膠電泳）

原理：

凋亡時(shí)DNA被內(nèi)切酶切割成180-200bp片段，電泳呈階梯狀條帶。

優(yōu)點(diǎn)：

經(jīng)典方法，直觀顯示DNA片段化。

成本低。

缺點(diǎn)：

靈敏度低（需大量細(xì)胞）。

無法區(qū)分凋亡與壞死（晚期凋亡可能彌散條帶）。

No.7

流式細(xì)胞術(shù)（亞G1峰分析）

原理：
凋亡細(xì)胞DNA斷裂丟失，PI染色后熒光強(qiáng)度低于G1期（亞G1峰）。

優(yōu)點(diǎn)：

高通量，可與其他標(biāo)記聯(lián)用。

無需特殊試劑。

缺點(diǎn)：

無法區(qū)分凋亡與機(jī)械損傷或碎片。

需排除細(xì)胞周期干擾。

No.8

 透射電鏡觀察

原理：

直接觀察凋亡細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)（如染色質(zhì)凝聚、凋亡小體）。

優(yōu)點(diǎn)：

金標(biāo)準(zhǔn)，提供形態(tài)學(xué)細(xì)節(jié)。

可區(qū)分凋亡與壞死。

缺點(diǎn)：

樣本制備復(fù)雜，設(shè)備昂貴。

無法定量統(tǒng)計(jì)。

如有需要，請(qǐng)聯(lián)系我們~

主營項(xiàng)目

1. 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

動(dòng)物飼養(yǎng)、疾病造模、行為學(xué)檢測(cè)、心功能、無創(chuàng)血壓、血常規(guī)、全自動(dòng)生化檢測(cè)等

2. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

CCK8/MTT、原代細(xì)胞分離、流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞劃痕、侵襲、遷移、EDU染色、轉(zhuǎn)染、穩(wěn)定株

3. 分子生物學(xué)

PCR檢測(cè)、熒光定量PCR、絕對(duì)定量PCR、端粒酶長(zhǎng)度、pull down、雙熒光素酶、SSR、SNP檢測(cè)等

4. 蛋白實(shí)驗(yàn)

WB、Co-IP、酵母雙雜

5. 病理實(shí)驗(yàn)

HE染色、免疫組學(xué)、電鏡

6. 生理生化實(shí)驗(yàn)

肝腎功能、抗氧化、免疫反應(yīng)等生理免疫指標(biāo);動(dòng)植物營養(yǎng)指標(biāo)、微量元素、重金屬、酶活等。

7. 多組學(xué)實(shí)驗(yàn)

基因組、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、蛋白組、代謝組、微生物多樣性、宏基因組、生信分析

8. 整體課題實(shí)驗(yàn)

方案設(shè)計(jì)、整體實(shí)驗(yàn)交付、標(biāo)書寫作、論文潤色、協(xié)助投稿

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