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裸鼠，也被稱為無(wú)胸腺裸鼠，是一種先天性胸腺缺陷的突變小鼠，其形成源于第VIII連鎖群內(nèi)裸體位點(diǎn)基因的純合。

裸鼠在科學(xué)研究中展現(xiàn)出巨大的潛力，這主要?dú)w功于其nu基因獨(dú)特的遺傳特性。經(jīng)過(guò)全球?qū)嶒?yàn)動(dòng)物遺傳育種學(xué)家的不懈努力，nu基因已被成功導(dǎo)入不同近交系動(dòng)物中，從而創(chuàng)建了一系列動(dòng)物模型。僅小鼠模型一種，就已建立了二十余種近交系裸鼠。

這些裸鼠具有不同的遺傳背景和nu基因的遺傳特性，為醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究者提供了一種極其寶貴的試驗(yàn)材料。本文將重點(diǎn)探討裸鼠的成瘤實(shí)驗(yàn)方法。

常見(jiàn)的成瘤細(xì)胞

常見(jiàn)的易成瘤細(xì)胞：Hep-G2（肝癌）、Hep2（喉癌）、NCI-H460（大細(xì)胞肺癌）、A431（表皮癌）、SK-OV-3（卵巢癌）、MCF-7（乳腺癌）、SKBR3、A375/B16-F10（人黑色素瘤細(xì)胞）、SGC7901（人胃腫瘤細(xì)胞）以及KB（人口腔表皮樣癌細(xì)胞）。

成瘤速度較慢的細(xì)胞：CNE（鼻咽癌）、A549（肺癌）、SPC-A-1（肺腺癌）、HT-29（結(jié)腸癌）、BEL-7402（肝癌）、MDA-MB-231（乳腺癌）、CT26（小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞）、SH-SY5Y（人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞）、U251（人膠質(zhì)瘤細(xì)胞）、BGC-823（人胃癌細(xì)胞）以及PC-3（人前列腺癌細(xì)胞）。

一些具有爭(zhēng)議的細(xì)胞：Hela（宮頸癌）、HCT（人回盲腸癌細(xì)胞/人結(jié)直腸癌腺癌細(xì)胞）。其他常用的細(xì)胞還包括BMSC（骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞）。

裸鼠成瘤小技巧

1、裸鼠的選擇：實(shí)驗(yàn)室常用的是BALB/c-nu裸小鼠。由于裸小鼠體內(nèi)正常T細(xì)胞可能隨年齡增長(zhǎng)或受病毒感染等因素而增加，因此接種腫瘤實(shí)驗(yàn)一般采用4-6周齡的裸鼠。

2、細(xì)胞狀態(tài)：細(xì)胞的狀態(tài)是成瘤實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵。應(yīng)取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，細(xì)胞密度達(dá)到80-90%為宜。在收集細(xì)胞前一天晚上更換新鮮培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞處理：胰酶消化細(xì)胞后用預(yù)冷的PBS洗兩遍，以去除細(xì)胞中殘余的血清。然后用PBS或者無(wú)血清培養(yǎng)基吹打細(xì)胞沉淀至合適的濃度。一般皮下瘤接種的細(xì)胞量為1-5×10^6個(gè)細(xì)胞/支，接種體積為0.1-0.2ml。有條件的實(shí)驗(yàn)室也可以加基質(zhì)膠以加速瘤塊的生成。

4、接種技巧：細(xì)胞消化后應(yīng)盡快接種到裸鼠皮下，一般盡量在半小時(shí)內(nèi)完成。接種前用槍將細(xì)胞懸液充分的吹散，防止細(xì)胞成團(tuán)。接種時(shí)，針頭在皮下進(jìn)針深一點(diǎn)，約1cm深，針頭在皮下左右滑動(dòng)幾次，以便細(xì)胞接種成團(tuán)。

5、保定裸鼠技巧：左手拇指和食指捏緊裸鼠頸背部皮膚，小拇指夾住裸鼠尾巴。

6、腫瘤觀察與測(cè)量：接種后1-2周左右可以見(jiàn)到皮下開始出現(xiàn)腫塊。根據(jù)腫瘤細(xì)胞的特性和接種細(xì)胞的量，一般皮下成瘤的周期為1-2個(gè)月。腫瘤大小測(cè)量一般為1周兩次，使用游標(biāo)卡尺測(cè)量腫瘤最長(zhǎng)和最短部位，并計(jì)算體積。

裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)疑難解答

問(wèn)：為什么選擇裸鼠而不是普通老鼠或小白鼠？

答：裸鼠最大的特點(diǎn)是沒(méi)有胸腺等免疫器官，免疫力幾乎為零，對(duì)腫瘤細(xì)胞沒(méi)有免疫作用，因此易于成瘤。

問(wèn)：瘤塊長(zhǎng)起來(lái)又消失是怎么回事？

答：這可能是炎癥反應(yīng)導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞被小鼠自身吸收。建議繼續(xù)觀察腫瘤細(xì)胞吸收之后是否能在幾周內(nèi)重新長(zhǎng)出。如果長(zhǎng)不起來(lái)，建議更換裸鼠。

問(wèn)：是否可以在一只小鼠上進(jìn)行多個(gè)點(diǎn)接種？

答：不可以。因?yàn)槎鄠€(gè)腫瘤塊可能會(huì)相互影響。

問(wèn)：腫瘤長(zhǎng)不出來(lái)是怎么回事？

答：可能的原因包括腫瘤生長(zhǎng)周期慢、細(xì)胞狀態(tài)差或不易成瘤、小鼠周齡太大或存在免疫排斥等。建議根據(jù)具體情況調(diào)整實(shí)驗(yàn)條件或更換細(xì)胞系、小鼠品種。

問(wèn)：腫瘤體積相差很大、大小不一是怎么回事？

答：這可能跟小鼠周齡及接種細(xì)胞量不一致導(dǎo)致。建議重新接種以確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的一致性。

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主營(yíng)項(xiàng)目

1. 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

動(dòng)物飼養(yǎng)、疾病造模、行為學(xué)檢測(cè)、心功能、無(wú)創(chuàng)血壓、血常規(guī)、全自動(dòng)生化檢測(cè)等

2. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

CCK8/MTT、原代細(xì)胞分離、流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞劃痕、侵襲、遷移、EDU染色、轉(zhuǎn)染、穩(wěn)定株

3. 分子生物學(xué)

PCR檢測(cè)、熒光定量PCR、絕對(duì)定量PCR、端粒酶長(zhǎng)度、pull down、雙熒光素酶、SSR、SNP檢測(cè)等

4. 蛋白實(shí)驗(yàn)

WB、Co-IP、酵母雙雜

5. 病理實(shí)驗(yàn)

HE染色、免疫組學(xué)、電鏡

6. 生理生化實(shí)驗(yàn)

肝腎功能、抗氧化、免疫反應(yīng)等生理免疫指標(biāo);動(dòng)植物營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)、微量元素、重金屬、酶活等。

7. 多組學(xué)實(shí)驗(yàn)

基因組、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、蛋白組、代謝組、微生物多樣性、宏基因組、生信分析

8. 整體課題實(shí)驗(yàn)

方案設(shè)計(jì)、整體實(shí)驗(yàn)交付、標(biāo)書寫作、論文潤(rùn)色、協(xié)助投稿

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康旭禾生物提供包括動(dòng)物實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)、分子實(shí)驗(yàn)、病理實(shí)驗(yàn)、流式檢測(cè)實(shí)驗(yàn)及論文翻譯、潤(rùn)色、投稿輔助等相關(guān)的各項(xiàng)服務(wù)。

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