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流式分選

通過不同的熒光素標(biāo)記樣本中一種或多種細(xì)胞，再經(jīng)由流式細(xì)胞儀區(qū)別不同細(xì)胞的光散射和熒光特征，將不同細(xì)胞分離。

流式分選的步驟相對來說比較固定：

制備單細(xì)胞懸液；

細(xì)胞染色；

細(xì)胞分選；

后續(xù)細(xì)胞培養(yǎng)、分析。

其中比較困難的就是關(guān)于抗體偶聯(lián)熒光素的選擇：比如，已經(jīng)確定好了要分選細(xì)胞的marker，但是偶聯(lián)的熒光素不知道怎么選。一般來說需要遵循三個原則：

01

根據(jù)儀器配置選擇熒光素：多色標(biāo)記熒光素搭配時還應(yīng)當(dāng)每個通道只選擇一種熒光素；各個通道之間的熒光素可以互相搭配；

02

根據(jù)抗原表達(dá)強(qiáng)弱合理分配熒光素：若抗原為高表達(dá)，可以將其與熒光強(qiáng)度較低的熒光素抗體相結(jié)合；

03

選擇光譜重疊小的熒光素：由于熒光素的寬發(fā)射譜的特點，熒光通道間有光譜重疊現(xiàn)象，因此選擇熒光素組合時要將光譜疊加可能性減到最低。多色流式實驗的時候往往需要通過補(bǔ)償調(diào)節(jié)消除光譜重疊的影響。

總結(jié)

了解了兩大常用的細(xì)胞分選方法后，應(yīng)當(dāng)如何選擇呢?

流式分選可進(jìn)行多參數(shù)分選以及不同熒光強(qiáng)度的分選，但對設(shè)備要求較高，對細(xì)胞刺激較大但分選靈活可以達(dá)到多方面的分選要求；

磁珠分選操作簡單，分選速度快，細(xì)胞活性好，對設(shè)備和技術(shù)員的要求較低，但只能根據(jù)一個參數(shù)進(jìn)行分選，而且也不能針對細(xì)胞胞內(nèi)標(biāo)記物進(jìn)行篩選。

下面詳細(xì)對比了磁珠分選和流式分選的優(yōu)劣勢：

如果磁珠分選能達(dá)到研究要求，一般首選磁珠分選，若磁珠分選達(dá)不到要求則再考慮用流式進(jìn)行分選。

以磁珠分選PBMCs樣本中人Tregs細(xì)胞為例，幫助大家更好的get要點:

Tregs是CD4+T細(xì)胞的一個亞群，最特異性的標(biāo)簽是核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子Foxp3，還高表達(dá)IL-2α受體(IL2Ra)—CD25，經(jīng)典的Treg標(biāo)志是CD4+CD25+Foxp3+T。如果檢測Tregs細(xì)胞，可以選擇膜標(biāo)記及核標(biāo)記同時鑒定。但如果需要分選Tregs細(xì)胞并進(jìn)行后續(xù)培養(yǎng)，就無法借助核轉(zhuǎn)錄因子Foxp3，因為磁珠分選只能進(jìn)行膜蛋白的標(biāo)記；流式分選標(biāo)記Foxp3時，需要固定、透化步驟，會導(dǎo)致細(xì)胞死亡。所以分選Tregs細(xì)胞選擇的標(biāo)記物一般為：膜表面蛋白CD4、CD25。

其分選策略為先陰性分選再陽性分選：

1、首先使用biotin偶聯(lián)的混合抗體(CD8、CD14、CD15CD16、CD19、CD36、CD56、CD123、TCRy/o、和CD235a)標(biāo)記所有CD4-細(xì)胞，再加入Anti-BiotinMicroBeads，那么先經(jīng)過磁場流出的是CD4+細(xì)胞；

2、在預(yù)富集的CD4+細(xì)胞中再加入CD25磁珠進(jìn)行陽性標(biāo)記待流出未標(biāo)記組分后，再進(jìn)行洗脫，即可獲得高純度的CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞。

流式分選助力小能手 - Curiox層流洗滌系統(tǒng)

層流洗滌是利用創(chuàng)新的樣品清洗方法與自動化操作相結(jié)合，層流洗滌技術(shù)實現(xiàn)了對傳統(tǒng)離心洗滌方法的全方位超越。其主要的突出優(yōu)勢有：

01溫和洗滌

使細(xì)胞免受離心力帶來的壓力，分選后細(xì)胞活性更高；

02保留率高

對稀有細(xì)胞和細(xì)胞數(shù)較少的樣本，層流洗滌依然保持高保留率；

03洗滌干凈

層流過程持續(xù)不斷地將碎片雜質(zhì)帶走，洗滌效果更好；

04可重復(fù)性高

標(biāo)準(zhǔn)化的洗滌流程取代手動離心操作，結(jié)果高度可重復(fù)；

05自動化處理

預(yù)設(shè)標(biāo)準(zhǔn)洗滌流程，輕松設(shè)置參數(shù)，自動化一鍵操作；

06生物安全性高

小型化的設(shè)計使其可置于生物安全柜中，安全性更高。

主營項目

1. 動物實驗

動物飼養(yǎng)、疾病造模、行為學(xué)檢測、心功能、無創(chuàng)血壓、血常規(guī)、全自動生化檢測等

2. 細(xì)胞實驗

CCK8/MTT、原代細(xì)胞分離、流式細(xì)胞實驗、細(xì)胞劃痕、侵襲、遷移、EDU染色、轉(zhuǎn)染、穩(wěn)定株

3. 分子生物學(xué)

PCR檢測、熒光定量PCR、絕對定量PCR、端粒酶長度、pull down、雙熒光素酶、SSR、SNP檢測等

4. 蛋白實驗

WB、Co-IP、酵母雙雜

5. 病理實驗

HE染色、免疫組學(xué)、電鏡

6. 生理生化實驗

肝腎功能、抗氧化、免疫反應(yīng)等生理免疫指標(biāo);動植物營養(yǎng)指標(biāo)、微量元素、重金屬、酶活等。

7. 多組學(xué)實驗

基因組、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、蛋白組、代謝組、微生物多樣性、宏基因組、生信分析

8. 整體課題實驗

方案設(shè)計、整體實驗交付、標(biāo)書寫作、論文潤色、協(xié)助投稿

聯(lián)系我們

康旭禾生物提供包括動物實驗、細(xì)胞實驗、分子實驗、病理實驗、流式檢測實驗及論文翻譯、潤色、投稿輔助等相關(guān)的各項服務(wù)。

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