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導(dǎo)語

在生命科學(xué)領(lǐng)域，分子間的相互作用是調(diào)控生命活動的核心機制。無論是DNA與蛋白質(zhì)的“密碼對話”，還是蛋白質(zhì)之間的“協(xié)作網(wǎng)絡(luò)”，都需要通過精準的實驗技術(shù)來揭示。本文用通俗易懂的語言，帶您了解ChIP、熒光素酶報告基因、Co-IP、Pull-down四大技術(shù)的原理、步驟和應(yīng)用場景，助您輕松掌握分子互作研究的核心工具！

一、

ChIP（染色質(zhì)免疫共沉淀）：捕捉DNA與蛋白的“約會證據(jù)”

原理
ChIP技術(shù)通過甲醛交聯(lián)“凍結(jié)”DNA與結(jié)合蛋白的相互作用，利用特異性抗體捕獲目標蛋白及其結(jié)合的DNA片段，最終通過PCR或測序鎖定DNA序列。

應(yīng)用
研究轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點、組蛋白修飾位點等。

實驗步驟

交聯(lián)固定：甲醛處理細胞，固定DNA-蛋白復(fù)合物

超聲破碎：將染色質(zhì)切割成200-1000bp片段

免疫沉淀：加入目標蛋白抗體，捕獲復(fù)合物

解交聯(lián)純化：高溫去除蛋白，純化DNA

分析檢測：qPCR、測序或芯片分析

注意事項
?? 抗體特異性是關(guān)鍵
?? 超聲條件需優(yōu)化避免過度破碎

二、

熒光素酶報告基因：基因調(diào)控的“信號燈”

原理
將待研究的DNA調(diào)控序列插入熒光素酶報告基因上游，通過檢測熒光強度反映轉(zhuǎn)錄因子對目標序列的激活/抑制效應(yīng)。

應(yīng)用
啟動子活性分析、miRNA靶標驗證等。

實驗步驟

載體構(gòu)建：目標序列克隆至熒光素酶報告載體

細胞轉(zhuǎn)染：與過表達質(zhì)粒/干擾RNA共轉(zhuǎn)染

裂解檢測：加入熒光素底物，測定發(fā)光值

數(shù)據(jù)歸一化：通常用海腎熒光素酶作為內(nèi)參

注意事項
?? 設(shè)置空載體對照和陽性對照
?? 避免細胞密度過高影響轉(zhuǎn)染效率

三、

Co-IP（免疫共沉淀）：蛋白質(zhì)“社交網(wǎng)絡(luò)”捕手

原理
利用抗體捕獲靶蛋白時，與其直接互作的蛋白會被共同沉淀，通過WB驗證互作伴侶。

應(yīng)用
驗證體內(nèi)蛋白質(zhì)相互作用、復(fù)合體組分鑒定。

實驗步驟

裂解樣本：使用非變性裂解液保持蛋白互作

預(yù)清除：用Protein A/G磁珠去除非特異性結(jié)合

抗體孵育：加入靶蛋白抗體或?qū)φ誌gG

沉淀洗滌：收集復(fù)合物并洗去雜質(zhì)

WB驗證：檢測沉淀物中是否存在互作蛋白

注意事項
?? 避免劇烈震蕩導(dǎo)致復(fù)合物解離
?? 設(shè)置IgG陰性對照

四、

Pull-down：體外互作的“釣魚實驗”

原理
將誘餌蛋白（如GST標簽蛋白）固定在基質(zhì)上，與“獵物蛋白”溶液孵育，捕獲特異性互作分子。

應(yīng)用
驗證直接相互作用、篩選互作蛋白。

實驗步驟

誘餌蛋白制備：表達純化帶標簽的重組蛋白

基質(zhì)結(jié)合：將誘餌蛋白固定到GST/鎳柱

孵育結(jié)合：與細胞裂解液/純化蛋白共孵育

洗脫分析：SDS-PAGE或質(zhì)譜鑒定結(jié)合蛋白

注意事項
?? 需設(shè)置空載體蛋白對照
?? 高鹽洗滌減少非特異性結(jié)合

技術(shù)對比速查表

結(jié)語

分子互作技術(shù)如同解碼生命的“偵探工具”，選擇合適的方法需要根據(jù)研究目標（體內(nèi)/體外、直接/間接作用）綜合判斷。掌握這些技術(shù)的原理和操作要點，將為您的課題研究提供堅實的技術(shù)支撐！

如有需要，請聯(lián)系我們~

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1. 動物實驗

動物飼養(yǎng)、疾病造模、行為學(xué)檢測、心功能、無創(chuàng)血壓、血常規(guī)、全自動生化檢測等

2. 細胞實驗

CCK8/MTT、原代細胞分離、流式細胞實驗、細胞劃痕、侵襲、遷移、EDU染色、轉(zhuǎn)染、穩(wěn)定株

3. 分子生物學(xué)

PCR檢測、熒光定量PCR、絕對定量PCR、端粒酶長度、pull down、雙熒光素酶、SSR、SNP檢測等

4. 蛋白實驗

WB、Co-IP、酵母雙雜

5. 病理實驗

HE染色、免疫組學(xué)、電鏡

6. 生理生化實驗

肝腎功能、抗氧化、免疫反應(yīng)等生理免疫指標;動植物營養(yǎng)指標、微量元素、重金屬、酶活等。

7. 多組學(xué)實驗

基因組、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、蛋白組、代謝組、微生物多樣性、宏基因組、生信分析

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方案設(shè)計、整體實驗交付、標書寫作、論文潤色、協(xié)助投稿

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