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模型差異總結(jié)

模型優(yōu)缺點(diǎn)與應(yīng)用場景

模型構(gòu)建案例

1. 實驗方法

① 基因敲除（Knockout）

技術(shù)：CRISPR/Cas9或同源重組靶向刪除特定外顯子（如F8 exon 16/17）。

應(yīng)用：小鼠血友病A/B型。

② 轉(zhuǎn)基因（Transgenic）

技術(shù)：顯微注射人類突變基因（如R539C、HLAD28/1*1501）至胚胎干細(xì)胞或受精卵。

應(yīng)用：模擬人類錯義突變。

③ 敲入（Knock-in）

技術(shù)：靶向插入特定突變（如R33Q、G581E）至內(nèi)源基因位點(diǎn)，保留表達(dá)框架。

應(yīng)用：研究CRM+/-表型。

④ 自然突變模型

技術(shù)：篩選自然發(fā)生的突變個體（如犬外顯子22倒位）。

應(yīng)用：犬血友病A型（Graham等, 1949；Hough等, 2002）。

2. 實驗材料

動物品系：小鼠：C57BL6、BALB/c、C3H等近交系；犬：Chapel Hill、Queen品系。

基因工具：CRISPR/Cas9系統(tǒng)、重組載體、胚胎干細(xì)胞（傳統(tǒng)方法）。

突變類型：外顯子倒位、錯義突變（R539C）、提前終止密碼子。

3. 造模后驗證與檢測

3.1 病理檢測

① 凝血功能評估：

APTT（活化部分凝血活酶時間）：顯著延長（正常值：25-35秒；模型可達(dá)>60秒）。

凝血因子活性（FVIII:C/FIX:C）：ELISA或發(fā)色底物法檢測，重型模型活性<1%。

② 出血表型觀察：

尾部出血時間：小鼠>10分鐘（正常<2分鐘）。

自發(fā)性出血：關(guān)節(jié)腫脹（犬模型）、肌肉血腫（綿羊模型）。

3.2 分子蛋白檢測

① 基因型驗證：

PCR擴(kuò)增+Sanger測序：確認(rèn)外顯子敲除或突變位點(diǎn)（如L176P）。

Southern blot：用于大片段缺失或倒位檢測（如犬外顯子22倒位）。

② 蛋白表達(dá)分析：

Western blot：檢測FVIII/FIX蛋白缺失（敲除模型）或異常大?。ㄍ蛔兡Ｐ停?。

ELISA：定量血漿凝血因子水平（CRM+模型可能顯示正?？乖珶o活性）。

③ CRM狀態(tài)鑒定：

交叉反應(yīng)抗體：CRM+（蛋白存在但無功能，如R33Q）；CRM-（蛋白完全缺失，如G379E）。

注意事項

1. 品系選擇：C57BL6小鼠免疫耐受性強(qiáng)，適合基因治療；BALB/c易產(chǎn)生抗體，適合免疫研究。

2. CRM分類：CRM+模型需結(jié)合功能實驗（如凝血活性檢測）明確表型。

3. 自然突變模型：犬外顯子22倒位與人類重型血友病A高度相似，是金標(biāo)準(zhǔn)模型。

通過系統(tǒng)選擇模型，可針對不同研究目標(biāo)（機(jī)制探索、治療開發(fā)、長期安全性）優(yōu)化實驗設(shè)計。

主營項目

1. 動物實驗

動物飼養(yǎng)、疾病造模、行為學(xué)檢測、心功能、無創(chuàng)血壓、血常規(guī)、全自動生化檢測等

2. 細(xì)胞實驗

CCK8/MTT、原代細(xì)胞分離、流式細(xì)胞實驗、細(xì)胞劃痕、侵襲、遷移、EDU染色、轉(zhuǎn)染、穩(wěn)定株

3. 分子生物學(xué)

PCR檢測、熒光定量PCR、絕對定量PCR、端粒酶長度、pull down、雙熒光素酶、SSR、SNP檢測等

4. 蛋白實驗

WB、Co-IP、酵母雙雜

5. 病理實驗

HE染色、免疫組學(xué)、電鏡

6. 生理生化實驗

肝腎功能、抗氧化、免疫反應(yīng)等生理免疫指標(biāo);動植物營養(yǎng)指標(biāo)、微量元素、重金屬、酶活等。

7. 多組學(xué)實驗

基因組、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、蛋白組、代謝組、微生物多樣性、宏基因組、生信分析

8. 整體課題實驗

方案設(shè)計、整體實驗交付、標(biāo)書寫作、論文潤色、協(xié)助投稿

聯(lián)系我們

康旭禾生物提供包括動物實驗、細(xì)胞實驗、分子實驗、病理實驗、流式檢測實驗及論文翻譯、潤色、投稿輔助等相關(guān)的各項服務(wù)。

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