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在熒光定量 PCR（qPCR）技術中，qPCR 擴增曲線與 Ct 值（或Cq值）是理解和分析實驗結果的核心要素。它們就像一把鑰匙，為我們解鎖基因表達量的秘密，在生命科學研究和臨床診斷等領域發(fā)揮著至關重要的作用。   

  qPCR通過熒光染料或探針與擴增的雙鏈DNA結合，產生熒光信號。機器實時監(jiān)測熒光信號變化，反映DNA擴增的數(shù)量。通過分析熒光信號的強度，可以定量分析樣品中的目標基因。PCR指數(shù)擴增過程當中，產物量與循環(huán)數(shù)之間的關系是：擴增產物量f(x)=起始模板量S×（1+E）^循環(huán)個數(shù)n。

2、什么是擴增曲線

定義：擴增曲線是描述PCR動態(tài)進程的曲線，以循環(huán)數(shù)為橫坐標，以反應過程中實時熒光信號強度為縱坐標。擴增曲線可以分成四個時期：基線期，指數(shù)期，線性期，平臺期。

擴增曲線常以線性圖譜和對數(shù)圖譜兩種形式展現(xiàn)。

線性圖譜：以 PCR 循環(huán)數(shù)為橫坐標，熒光信號強度為縱坐標，直接呈現(xiàn)熒光信號隨循環(huán)數(shù)增加的變化情況。

對數(shù)圖譜：以 PCR 循環(huán)數(shù)為橫坐標，熒光信號強度的對數(shù)為縱坐標，突出指數(shù)增長期的特征，此階段曲線會呈現(xiàn)為一條直線。  

對數(shù)圖譜  

線性圖譜

2、什么是CT值（Cq值）

 定義： PCR擴增過程中，擴增產物的熒光信號達到設定的熒光閾值時的所對應的擴增循環(huán)數(shù)（Cycle Threshold）。C代表Cycle，T代表Threshold。

閾值（threshold）：在擴增曲線的指數(shù)增長區(qū)域內，選擇任意適當位置設定的熒光檢出界限。

熒光閾值一般由儀器自動設置，也可以手動設置。熒光域值閾值線的缺省設置通常是PCR擴增前3-15個循環(huán)的熒光信號標準偏差的10倍。

同一次反應中對于不同的基因可單獨設置閾值，但對于同一個基因擴增一定要設置相同的閾值。

3、為什么要有CT值
   3.1Ct值具有重現(xiàn)性：同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內擴增，得到的Ct值是恒定的。

注：模板為10^5k拷貝GAPDH，用GAPDH引物擴增。96個孔重復結果的Ct平均值為19.1，變異系數(shù)（Cv）=0.002.   3.2Ct值與起始模板的線性關系：由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關系，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定。

主營項目

1. 動物實驗

動物飼養(yǎng)、疾病造模、行為學檢測、心功能、無創(chuàng)血壓、血常規(guī)、全自動生化檢測等

2. 細胞實驗

CCK8/MTT、原代細胞分離、流式細胞實驗、細胞劃痕、侵襲、遷移、EDU染色、轉染、穩(wěn)定株

3. 分子生物學

PCR檢測、熒光定量PCR、絕對定量PCR、端粒酶長度、pull down、雙熒光素酶、SSR、SNP檢測等

4. 蛋白實驗

WB、Co-IP、酵母雙雜

5. 病理實驗

HE染色、免疫組學、電鏡

6. 生理生化實驗

肝腎功能、抗氧化、免疫反應等生理免疫指標;動植物營養(yǎng)指標、微量元素、重金屬、酶活等。

7. 多組學實驗

基因組、轉錄調控、蛋白組、代謝組、微生物多樣性、宏基因組、生信分析

8. 整體課題實驗

方案設計、整體實驗交付、標書寫作、論文潤色、協(xié)助投稿

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