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缺血性腦卒中是一種嚴(yán)重的神經(jīng)系統(tǒng)疾病，其中組織損傷是導(dǎo)致死亡的主要原因。近年來的研究表明，缺血后的再灌注過程中產(chǎn)生的過量氧自由基在組織損傷中起著關(guān)鍵作用。因此，研究腦缺血再灌注損傷的作用機(jī)制已成為全球科學(xué)界的關(guān)注焦點。在眾多研究方法中，線栓法因其操作簡便、無需開顱、無需呼吸機(jī)輔助等優(yōu)點，成為構(gòu)建腦局部缺血再灌注損傷模型的首選方法。該方法能夠精確控制缺血及再灌注的時間，并且對局部條件的控制較為容易，對全身的影響較小，是制作腦局部缺血再灌注損傷模型的理想選擇。

本實驗旨在通過線栓法復(fù)制大鼠大腦中動脈缺血再灌注（Middle Cerebral Artery Ischemia/Reperfusion，MCAO/R）損傷模型。通過在再灌注后的不同時間點處死大鼠，本研究將探討該模型制作方法的成功率、穩(wěn)定性以及再灌注后不同時間點腦梗死體積的變化。這將為深入理解腦缺血再灌注損傷的病理機(jī)制提供重要的實驗依據(jù)，并為開發(fā)新的治療策略奠定基礎(chǔ)。

01實驗動物

雄性SD大鼠，體質(zhì)量250～280g

02造模過程

1. 麻醉

采用異氟烷對大鼠進(jìn)行吸入麻醉，調(diào)整異氟烷濃度以維持適宜的麻醉深度，確保大鼠在手術(shù)過程中無痛感且生命體征穩(wěn)定。

2. 手術(shù)切口與血管暴露

■ 在大鼠頸部進(jìn)行正中切口，剪開皮膚，分離皮下軟組織，暴露頸動脈鞘。

■ 仔細(xì)分離右側(cè)頸總動脈（CCA）、頸外動脈（ECA）和頸內(nèi)動脈（ICA）。

3. 血管操作與栓塞放置

■在枕動脈以上結(jié)扎ECA，并在ECA靠近分叉處放置一備用線。

■使用動脈夾分別夾閉ICA和CCA。

■電凝刀離斷枕動脈及ECA遠(yuǎn)心端，在ECA上剪一缺口，將備好的栓線經(jīng)ECA插入ICA至栓線頭部達(dá)到MCA起始處，用備用線打結(jié)固定栓線。

4. 血流恢復(fù)與傷口處理

■取下ICA、CCA的動脈夾，恢復(fù)血流。

■清理創(chuàng)口并縫合肌肉及皮膚，傷口消毒后局部使用抗生素預(yù)防感染。

5. 缺血再灌注操作

■在缺血2小時后拔出栓線，形成大鼠腦缺血再灌注損傷。

6. 假手術(shù)組處理

■假手術(shù)組大鼠與MCAO/R組操作步驟前部分相同，但不進(jìn)行栓線插入操作。

7. 術(shù)后護(hù)理

■手術(shù)后將動物回籠飼養(yǎng)，密切觀察其恢復(fù)情況，確保動物福利。

造模成功標(biāo)準(zhǔn)：大鼠清醒后1h，依照Longa5級4分制神經(jīng)學(xué)評分原則對大鼠行為進(jìn)行評分。Longa5級4分制評分原則：

① 0分，正常，無神經(jīng)系統(tǒng)異常的體征。

② 1分，不能完全伸展病變對側(cè)上肢。

③ 2分，行走時向?qū)?cè)旋轉(zhuǎn)。

④ 3分，行走時向?qū)?cè)傾倒。

⑤ 4分，無自發(fā)活動伴意識降低。

得1-4分者為成功模型。術(shù)中意外死亡、再灌注24h內(nèi)死亡、蛛網(wǎng)膜下腔出血的大鼠被剔除。

03實驗結(jié)果

C1：假手術(shù)組 

C2：改良模型組

白色為梗死區(qū)域，紅色為正常區(qū)域

假手術(shù)組大鼠冠狀切面左右腦半球染色均勻、對稱，灰質(zhì)呈紅色，白質(zhì)呈淺紅或瓷白色，無呈蒼白色的梗死區(qū)(圖C1)。模型組大鼠腦組織缺血側(cè)可見皮質(zhì)和(或)皮質(zhì)下呈蒼白色的梗死區(qū)域，包括基底核的外側(cè)、頂葉和顳葉皮質(zhì)、海馬、紋狀體等區(qū)域，與對側(cè)半球呈紅色的正常腦組織對比鮮明，白色區(qū)與紅色區(qū)域之間界限不明顯(圖C2)。

參考文獻(xiàn)-孫念霞,高維娟,易忠良.改良線栓法制作SD大鼠局灶性腦缺血再灌注模型[J].中國組織工程研究,2014,18(02):225-230.

(1)圖A為假手術(shù)組大鼠海馬CA1區(qū)各層細(xì)胞排列規(guī)則、整齊，神經(jīng)突起自然排列，胞質(zhì)內(nèi)尼氏體為紫藍(lán)色顆?；驂K狀結(jié)構(gòu)，核圓形或橢圓形居中，核仁圓形居中，間質(zhì)均勻、淡染。

(2)圖B為模型組術(shù)側(cè)海馬區(qū)各層細(xì)胞排列紊亂，部分神經(jīng)細(xì)胞消失，殘存神經(jīng)細(xì)胞胞膜皺縮內(nèi)陷，神經(jīng)纖維異常彎曲，胞質(zhì)內(nèi)尼氏體消失、淡染、模糊，核固縮均質(zhì)化，核仁不規(guī)則、易位。

參考文獻(xiàn)-孫念霞,高維娟,易忠良.改良線栓法制作SD大鼠局灶性腦缺血再灌注模型[J].中國組織工程研究,2014,18(02):225-230.

參考文獻(xiàn)：

[1]孫念霞,高維娟,易忠良.改良線栓法制作SD大鼠局灶性腦缺血再灌注模型[J].中國組織工程研究,2014,18(02):225-230.

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