波多野结衣中文字幕一区二区三区,色综合救久久无码中文幕波多,日韩一区二区高清视频在线观看,极品身材高颜值在线播放,一本一道久久成人网站

在生物醫(yī)藥領(lǐng)域，基因轉(zhuǎn)染是一種常見的實驗技術(shù)，用于將外源基因?qū)爰?xì)胞中。然而，要想成功地進行穩(wěn)定轉(zhuǎn)染并篩選出陽性細(xì)胞株，選擇合適的篩選抗生素至關(guān)重要。本文將詳細(xì)介紹如何選擇穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的篩選抗生素。

通常構(gòu)建的載體上有兩個抗性基因，如，氨芐青霉素（Amp）和、新霉素抗性基因(neo)。

那么建立穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系時該用哪種抗生素來篩細(xì)胞呢？

很多真核表達(dá)質(zhì)粒上都有兩個抗性基因，但一般其中只有一個抗性可以用來篩細(xì)胞。其中氨芐青霉素對細(xì)胞是沒有篩選作用的，這是用于構(gòu)建克隆時篩選細(xì)菌的。所以這種情況下只能用G418。細(xì)胞轉(zhuǎn)染后用G418來加壓篩選，其原因是在載體上具有新霉素的抗性基因，當(dāng)載體被轉(zhuǎn)染入細(xì)胞后，由于細(xì)胞擁有了抗新霉素的特性，因此在用新霉素加壓時，陽性細(xì)胞就不會被G418殺死。相反，未被轉(zhuǎn)染入載體的陰性細(xì)胞由于沒有對新霉素的抗性，那么當(dāng)使用G418加壓時，當(dāng)然就會被殺死。

如圖，這個載體就是兩個抗性，Amp和neo

但兩個抗性的本質(zhì)區(qū)別在哪？

Amp是在bla啟動子驅(qū)動下表達(dá)，bla是原核表達(dá)啟動子。在大腸桿菌可以表達(dá)，因此，轉(zhuǎn)化后的質(zhì)粒用Amp可以篩選到，而不用G418篩選。而neo是在SV40啟動子驅(qū)動下表達(dá)。SV40是真核表達(dá)啟動子，轉(zhuǎn)入真核細(xì)胞表達(dá)。所以只有轉(zhuǎn)入載體的細(xì)胞才能用G418篩選出來。

G418是一種氨基糖苷類似物，它通過干擾核糖體功能來阻止哺乳動物細(xì)胞蛋白質(zhì)的合成。

因此在篩選過程中G418的濃度將對轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選產(chǎn)生很大的影響。在篩選之前最好進行條件優(yōu)化確定最佳篩選濃度。盡管文獻(xiàn)有報道篩選濃度，最好還是要自己親自做一下篩選濃度的確定。一般來說，篩選濃度越高，篩選時間越長，陽性細(xì)胞的篩選率越高。但是，過高的篩選濃度或過長的篩選時間可能會對細(xì)胞造成毒性，導(dǎo)致細(xì)胞生長緩慢或死亡。因此，您需要根據(jù)您的實驗需求和細(xì)胞生長情況，選擇合適的篩選濃度和時間。另外，為了確保篩選的可靠性和重復(fù)性，建議在正式實驗前進行預(yù)實驗，以確定篩選的最佳條件。

還可以用其他的抗生素嗎？

用于陽性細(xì)胞篩選的還可能有潮霉素（標(biāo)有Hyg),等等。根據(jù)載體中所含有的抗性基因進行選擇。

比如：1 pBlast 質(zhì)粒 具有氨芐青霉素和Blast抗性，篩細(xì)菌時用氨芐青霉素，篩細(xì)胞時用Blast；2 pZeocin質(zhì)粒 具有卡那霉素和Zeocin抗性，篩細(xì)菌時用卡那霉素，篩細(xì)胞時用Zeocin。

如有實驗技術(shù)問題，可咨詢我們

電話：15579126092  

網(wǎng)站：http://consurebio.com/

主營項目

1. 動物實驗

動物飼養(yǎng)、疾病造模、行為學(xué)檢測、心功能、無創(chuàng)血壓、血常規(guī)、全自動生化檢測等

2. 細(xì)胞實驗

CCK8/MTT、原代細(xì)胞分離、流式細(xì)胞實驗、細(xì)胞劃痕、侵襲、遷移、EDU染色、轉(zhuǎn)染、穩(wěn)定株

3. 分子生物學(xué)

PCR檢測、熒光定量PCR、絕對定量PCR、端粒酶長度、pull down、雙熒光素酶、SSR、SNP檢測等

4. 蛋白實驗

WB、Co-IP、酵母雙雜

5. 病理實驗

HE染色、免疫組學(xué)、電鏡

6. 生理生化實驗

肝腎功能、抗氧化、免疫反應(yīng)等生理免疫指標(biāo);動植物營養(yǎng)指標(biāo)、微量元素、重金屬、酶活等。

7. 多組學(xué)實驗

基因組、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、蛋白組、代謝組、微生物多樣性、宏基因組、生信分析

8. 整體課題實驗

方案設(shè)計、整體實驗交付、標(biāo)書寫作、論文潤色、協(xié)助投稿

聯(lián)系我們

康旭禾生物提供包括動物實驗、細(xì)胞實驗、分子實驗、病理實驗、流式檢測實驗及論文翻譯、潤色、投稿輔助等相關(guān)的各項服務(wù)。

聯(lián)系方式：15579126092      

公司官網(wǎng)：http://consurebio.com/

公司地址：江西省南昌市南昌縣小藍(lán)VR產(chǎn)業(yè)基地D座2樓