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一文講清楚流式細胞術(shù)的原理與應用

瀏覽:1292 發(fā)表時間:2024-11-14

一文講清楚流式細胞術(shù)的原理與應用

流式細胞術(shù)(Flow Cytometry,F(xiàn)CM)是一種高效的用于單細胞分析/分選的生物學技術(shù),其集細胞生物化學技術(shù)、單克隆抗體技術(shù)、激光技術(shù)、流體力學、電子技術(shù)、計算機技術(shù)、分子生物學、臨床醫(yī)學等理論于一體。FCM能夠?qū)Υ罅康募毎蚍羌毎w粒的物理、生理、生化、免疫、遺傳、分子生物學性狀及功能狀態(tài)等進行定性或定量檢測。


現(xiàn)代流式細胞儀自問世以來,已歷經(jīng)了40多年的發(fā)展,其被廣泛用于從基礎研究到臨床實踐的各個方面,如:分子生物學、細胞生物學、遺傳學、免疫學、腫瘤學、血液學、藥理學、植物學及臨床醫(yī)學等眾多領(lǐng)域,在生物學研究領(lǐng)域中發(fā)揮不可或缺的作用。FCM具有高通量、多參數(shù)、速度快,采集數(shù)據(jù)量大、操作靈活等優(yōu)點。下面就和小醫(yī)一起來了解下流式細胞術(shù)的詳細實驗應用及操作方法吧!



PART 01

流式細胞術(shù)原理


01

細胞檢測 

細胞通過液流系統(tǒng)被引入流式細胞儀,其中包含鞘液(sheath)以保持細胞的穩(wěn)定流動。


細胞被激光束照射,激光束會激發(fā)細胞產(chǎn)生光信號,包括前向散射光(FSC)和側(cè)向散射光(SSC)。


02

熒光檢測 

細胞表面的抗原可以被特定的熒光抗體標記。


激發(fā)熒光后,熒光信號被檢測器捕獲并轉(zhuǎn)換成電脈沖信號。


03

數(shù)據(jù)分析 

電脈沖信號通過電子系統(tǒng)轉(zhuǎn)換成計算機可處理的數(shù)據(jù)。


通過專業(yè)的數(shù)據(jù)分析軟件,如FlowJo或Cytobank,可以生成細胞的詳細圖譜,包括細胞大小、熒光強度等信息。



PART 02

流式細胞術(shù)的6個應用


流式細胞術(shù)(Flow Cytometry, FCM)是一種強大的技術(shù),能夠快速、準確地分析單個細胞的特性。以下是流式細胞術(shù)的一些主要應用:


01

細胞分選 

具有特定特性的細胞可以通過流式細胞儀的分選功能被分離出來,用于進一步的實驗或研究。


流式細胞術(shù)廣泛應用于生物學、醫(yī)學等領(lǐng)域,特別是在免疫學、血液學、腫瘤學等研究中發(fā)揮著重要作用。通過這項技術(shù),科學家可以高效地分析細胞的各種參數(shù),如細胞表面標記、細胞內(nèi)蛋白質(zhì)表達、細胞周期、DNA含量等,從而幫助理解細胞行為和疾病機制。


02

免疫狀態(tài)分析  

通過流式細胞術(shù),可以對淋巴細胞及其亞群進行詳細分析,幫助評估免疫系統(tǒng)的狀態(tài)。例如,在自身免疫性疾病、感染性疾病的治療中,監(jiān)測免疫細胞的數(shù)量和功能變化至關(guān)重要。


03

血液病診斷  

流式細胞術(shù)可用于診斷各種血液疾病,如白血病、淋巴瘤等。通過檢測白血病細胞的特定免疫表型,可以輔助確定疾病類型和預后。


04

腫瘤研究 

在腫瘤學研究中,流式細胞術(shù)用于分析腫瘤細胞的異質(zhì)性,評估腫瘤的生長速度和對治療的反應。此外,該技術(shù)還可以用于監(jiān)測腫瘤復發(fā)和轉(zhuǎn)移。


05

藥物篩選和治療監(jiān)測  

在藥物研發(fā)過程中,流式細胞術(shù)可用于篩選對藥物敏感的細胞群體,加速新藥的開發(fā)和上市。同時,在藥物治療過程中,通過監(jiān)測患者細胞的變化,可以及時調(diào)整治療方案。

06

遺傳學和血液學研究  

流式細胞術(shù)還可以用于分析血液樣本中的遺傳標記,如DNA、RNA和蛋白質(zhì),為血液疾病的遺傳學診斷和個性化治療提供依據(jù)。


總之,流式細胞術(shù)在生物醫(yī)學研究和臨床實踐中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用,其應用范圍不斷擴展,為疾病的早期診斷、治療監(jiān)測和預后評估提供了強有力的工具。


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動物實驗

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細胞實驗

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3


分子生物學

PCR檢測、熒光定量PCR、絕對定量PCR、端粒酶長度、pull down、雙熒光素酶、SSR、SNP檢測等

4


蛋白實驗

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5


病理實驗

HE染色、免疫組學、電鏡

6


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肝腎功能、抗氧化、免疫反應等生理免疫指標;動植物營養(yǎng)指標、微量元素、重金屬、酶活等。

7


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基因組、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、蛋白組、代謝組、微生物多樣性、宏基因組、生信分析

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END

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