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為了研究RNA的功能，通常需要通過逆轉(zhuǎn)錄過程將RNA轉(zhuǎn)化為更穩(wěn)定的互補(bǔ)DNA（cDNA）。之后cDNA可通過分子克隆、PCR和測序等技術(shù)做進(jìn)一步的研究。因此，逆轉(zhuǎn)錄過程是許多RNA實(shí)驗(yàn)研究流程的關(guān)鍵步驟。

逆轉(zhuǎn)錄——reverse transcription，是以RNA為模板合成DNA的過程，合成的DNA稱為cDNA。逆轉(zhuǎn)錄過程遺傳信息的流動(dòng)方向(RNA到DNA)，與轉(zhuǎn)錄過程(DNA到RNA)的方向相反，故稱為逆轉(zhuǎn)錄。

分子生物學(xué)最初的中心法則認(rèn)為，DNA轉(zhuǎn)錄成RNA，然后再由RNA翻譯成蛋白質(zhì)。但在上世紀(jì)70年代，隨著兩支科研團(tuán)隊(duì)（分別為威斯康星大學(xué)的Howard Temin領(lǐng)導(dǎo)的團(tuán)隊(duì)和麻省理工大學(xué)David Baltimore領(lǐng)導(dǎo)的團(tuán)隊(duì)）各地獨(dú)立發(fā)現(xiàn)了與RNA病毒（逆轉(zhuǎn)錄酶病毒）復(fù)制相關(guān)的新酶，這一理論遇到了挑戰(zhàn) 。這些酶可以將病毒RNA基因組轉(zhuǎn)換成互補(bǔ)DNA (cDNA)分子，隨后即可整合到宿主的基因組中。這些酶為RNA依賴性DNA聚合酶，又稱逆轉(zhuǎn)錄酶。因?yàn)樗鼈兣c核心理論的DNA到RNA流程不同，而是由RNA模板轉(zhuǎn)錄成cDNA分子。1975年，Temin 和 Baltimore憑借在發(fā)現(xiàn)逆轉(zhuǎn)錄酶方面的創(chuàng)舉，獲得諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)（與Renato Dulbecco共同獲得，后者憑借在誘導(dǎo)腫瘤病毒方面的成果獲獎(jiǎng)）。

RNA逆轉(zhuǎn)錄原理主要涉及以下幾個(gè)關(guān)鍵步驟和概念：

01

逆轉(zhuǎn)錄的定義  

RNA逆轉(zhuǎn)錄是將RNA轉(zhuǎn)化為互補(bǔ)DNA（cDNA）的過程。這一過程是許多RNA實(shí)驗(yàn)研究的關(guān)鍵步驟，因?yàn)樗试S通過分子克隆、PCR和測序等技術(shù)進(jìn)一步分析cDNA。

02

逆轉(zhuǎn)錄酶   

逆轉(zhuǎn)錄酶是一種特定的酶，能夠以RNA為模板合成cDNA。這種酶存在于一些RNA病毒中，如某些逆轉(zhuǎn)錄病毒。這些病毒的RNA不進(jìn)行自我復(fù)制，而是通過逆轉(zhuǎn)錄酶將RNA轉(zhuǎn)化為DNA，進(jìn)而整合到宿主細(xì)胞的DNA中。

03

實(shí)驗(yàn)步驟   

在實(shí)驗(yàn)中，首先從細(xì)胞、組織、血液或植物等樣本中提取RNA。然后，通過特定的化學(xué)處理（如使用Trizol）來穩(wěn)定RNA并防止其降解。接著，通過加入反轉(zhuǎn)錄酶和必要的反應(yīng)條件（如溫度、pH值和鹽濃度），在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下合成cDNA。

04

注意事項(xiàng)   

在逆轉(zhuǎn)錄過程中，需要注意基因組DNA的去除，以避免污染反轉(zhuǎn)錄結(jié)果。通常，這一過程會(huì)在RNA分離過程中加入DNase I，并在RT-PCR前徹底去除，以確保單鏈DNA（如引物和cDNA）的穩(wěn)定性。

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主營項(xiàng)目

1

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

動(dòng)物飼養(yǎng)、疾病造模、行為學(xué)檢測、心功能、無創(chuàng)血壓、血常規(guī)、全自動(dòng)生化檢測等

2

細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

CCK8/MTT、原代細(xì)胞分離、流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞劃痕、侵襲、遷移、EDU染色、轉(zhuǎn)染、穩(wěn)定株

3

分子生物學(xué)

PCR檢測、熒光定量PCR、絕對定量PCR、端粒酶長度、pull down、雙熒光素酶、SSR、SNP檢測等

4

蛋白實(shí)驗(yàn)

WB、Co-IP、酵母雙雜

5

病理實(shí)驗(yàn)

HE染色、免疫組學(xué)、電鏡

6

生理生化實(shí)驗(yàn)

肝腎功能、抗氧化、免疫反應(yīng)等生理免疫指標(biāo);動(dòng)植物營養(yǎng)指標(biāo)、微量元素、重金屬、酶活等。

7

多組學(xué)實(shí)驗(yàn)

基因組、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、蛋白組、代謝組、微生物多樣性、宏基因組、生信分析

8

整體課題實(shí)驗(yàn)

方案設(shè)計(jì)、整體實(shí)驗(yàn)交付、標(biāo)書寫作、論文潤色、協(xié)助投稿

END

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